第三章蛋白质化学II.ppt

第四节 蛋白质的分类 （1）依据外形分类 球状蛋白质：globular protein，如细胞酶类 纤维状蛋白质：fibrous protein，如胶原蛋白 膜蛋白质：membrane protein，细胞膜蛋白 （2）依据蛋白质的组成分类 单纯蛋白质 simple protein 单纯蛋白，仅由氨基酸组成 结（缀）合蛋白质 conjugated protein 单纯蛋白质 清蛋白和球蛋白 albumin and globulin 广泛存在于动物组织 谷蛋白和醇溶谷蛋白 glutelin and prolamin 植物蛋白，不溶于水，易溶于稀酸/碱 精蛋白和组蛋白 碱性蛋白存在于细胞核 硬蛋白：角蛋白、胶原蛋白、弹性蛋白、丝蛋白 结（缀）合蛋白质 色蛋白：简单蛋白+色素物质 糖蛋白：简单蛋白+糖类物质 脂蛋白：简单蛋白+脂类结合 核蛋白：简单蛋白+核酸 磷蛋白：简单蛋白+磷酸 蛋白质的各级结构 一、蛋白质的氨基酸组成 蛋白质完全水解成氨基酸后，可用氨基酸分析仪作出全分析，从而获得蛋白质的氨基酸组成情况。 或者获得氨基酸残基数。 注意：氨基酸分析仪所得到的结果是氨基酸的含量，须转化成氨基酸残基的量才能准确确定蛋白质中各种氨基酸残基的数量。 1、影响蛋白质三维结构的因素 内力（内因） 蛋白质分子内各原子间作用力 外力（外因） 与溶剂及其他溶质作用力 2、蛋白质分子内部的作用力 肽键、二硫键——一级结构 氢键、疏水作用、范德华力、离子键、二硫键——三维结构 1、肽键 ①肽键中C-N键有部分 双键性质 ——不能自由旋转 ②组成肽键原子处于 同一平面（肽平面） ③键长及键角一定 ④大多数情况以反式 结构存在 2、二硫键 (Disulfide Bond) —S—S— 由含硫氨基酸形成 起稳定肽链空间结构的作用,二硫键数目越多，蛋白质分子对抗外界因素影响的稳定性越大。 二硫键被破坏，蛋白质生物活性丧失 3、酯键 (Ester Bond) Ser/Thr的羟基与AA的羧基形成酯键 磷酸与含羟基AA缩合形成磷酸酯键 维系某些蛋白质的结构，对其行使功能也是必不可少。 4、离子键 ( Electrostatic attraction ) 又称盐键：具有相反电荷的两个基团间的库仑作用。 5、配位键 (Metal-ion Coordination) 两个原子之间形成的共价键 共用电子对由其中一个原子提供 金属离子与蛋白质的结合方式 例如：铁氧还蛋白、固氮酶铁蛋白、细胞色素C含铁离子 胰岛素含锌离子 6、氢键( Hydrogen bond ) 两负电性原子（如F、N、O、S)对氢原子的静电引力所形成 X—H…Y 质子给予体X-H和质子接受体Y间相互作用 氢键具有： 方向性-（键角）指X—H与H…Y间的夹角，直线时氢键最强 饱和性- X—H只与一个Y结合 7、范德华力 (van der Waals force ) 8、疏水作用 ( Hydrophobic Interactions) 非极性侧链为避开极性溶剂水彼此靠近所产生 主要存在蛋白质的内部结构 蛋白质表面通常具有极性链或区域 蛋白质可形成分子内疏水链/腔/缝隙 ——稳定生物大分子的高级结构 前提 1.样品必需纯（97%以上） 2.知道蛋白质的分子量 3.知道蛋白质由几个亚基组成 4.测定蛋白质的AA组成并根据分子量 计算每种AA的个数 5.测定水解液中的氨量计算酰胺的含量 蛋白质测序策略 (1) 测定蛋白质分子中多肽链的数目 通过测定末端氨基酸残基的摩尔数与蛋白质分子量之间的关系，即可确定多肽链的数目。 蛋白质测序策略 (2) 多肽链的拆分 蛋白质测序策略 几条多肽链借助非共价键连接在一起，称为寡聚蛋白质，血红蛋白为四聚体，烯醇化酶为二聚体。 可用8mol/L尿素或6mol/L盐酸胍处理，即可分开多肽链(亚基)。 蛋白质测序策略 (3) 断开二硫键 在8mol/L尿素或6mol/L盐酸胍存在下，用过量的?-巯基乙醇处理，使二硫键还原为巯基，然后用烷基化试剂保护生成的巯基，防止重新被氧化。 蛋白质测序策略 蛋白质测序策略 (5)分析多肽链的N-末端和C-末端 (6)多肽链断裂成多个肽段 采用两/多种不同的断裂方法将多肽 断裂成两套或多套肽段，并将其分离。 蛋白质测序策略 (7)测定每个肽段的氨基酸顺序 蛋白质测序策略 (9)确定原多肽链中二硫键的位置。 1、肽链末端分析（末端氨基酸残基测定） 两类多肽链末端氨基酸残基： N-端氨基酸 C-端氨基酸 在肽链氨基酸顺序分析中，最重要的是