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2010-10-20 承担单位：福建省农科院试验项目：试验人员：试验负责：报告日期：20-10-28 计数月份：20年月 研究资格系数 (0.5-1.0) 实验设计系数 （0.9-1.0） 报告得分 总分 实验设计 实验记载 实验分析 实验简报 实验文章 1-20% 21-40% 41-60% 61-80% 81-100% 1%-5% 设计，实施实验，记载，分析清晰，结论清晰文献完整，发表水平 福建省农业科学院农业生物资源研究所 农业微生物研究中心 电话: 0591 传真: 0591 1．试验目的 生活用水的水源常被生活污水或工业废水或人与动物的粪便所污染。粪便污物含有不同类型的微生物，有腐生性的和病原性的。腐生性微生物对人无害，而病原性微生物则能引起传染病的发生。水源水如湖水、河水、池水和溪水，常含有很多腐生菌，但仍可安全地饮用。然而水源一旦被粪便污染，就可能也被肠道病原体污染而引起肠道传染病甚至流行病，如霍乱、伤寒、细菌性痢疾和阿米巴性痢疾以及脊髓灰质炎和传染性肝炎等病毒性疾病[1]，因此必须对生活用水及其水源水进行严格的细菌学检查。 本实验将采用稀释涂布平板法分离和纯化宁德市九都镇示范点水质微生物，应用平板菌落计数技术测定水中细菌总数，研究宁德九都自来水经水质净化设备处理后，水中的细菌总数是否减少，并统计细菌在水样中的种类和含量。由于水中细菌种类繁多，它们对营养和其他生长条件的要求差别很大，不可能找到一种培养基在一种条件下，使水中所有的细菌均能生长繁殖，因此，以一定的培养基平板上生长出来的菌落，计算出来的水中细菌总数仅是一种近似值，目前一般采用普通牛肉膏蛋白胨琼脂培养基。 2．试验方法 2.1 供试材料 2010年10月22日于宁德市九都镇水质示范点采集的水样，每处水样重复取三瓶，分别为A瓶、B瓶、C瓶。 2.2 实验器3g、蛋白胨 5g、葡萄糖 10g、琼脂15-20g、水1000ml、pH 7.2-7.6。 伊红美蓝（EMB）培养基：蛋白胨10.0g、乳糖10.0g、磷酸氢二钾2.0g、琼脂15.0g、伊红0.4g、美蓝0.065g、水1000ml、pH 7.Luria-Bertani）液体培养基：酵母膏5g、蛋白胨10g、NaCl 10g、水1000ml、pH 7.09ml无菌水的试管 2.2.3 仪器或其他用具 无菌采样瓶、灭菌玻璃涂棒、灭菌试管、1ml移液枪、无菌1ml移液枪头、200 μL移液枪、无菌200 μL移液枪头、接种环、无菌培养皿、振荡器等。 2.3 实验方法 2.3.1 制备水样稀释液 用三个无菌空试管分别盛约10ml水样（进水口、出水口、水龙头的水样各一份）。用1ml移液枪从原液中吸取1ml加入盛有9ml无菌水的试管中充分混匀，然后用1ml移液枪从此试管中吸取1ml加入另一盛有9ml无菌水的试管中，混合均匀，以此类推制成10-1、10-2、10-3不同稀释度的水样溶液。 2.3.2 平板涂布 超净台上无菌操作，溶液在振荡器上振荡10-20s，吸取200μL至相应标记浓度的平板上，溶液滴至平板中央，用涂布棒涂匀培养将涂好的平板用包好倒置于30℃中培养平均菌落数每＝同一稀释度的平均菌落数 × 稀释倍数×。NA平板上的单菌落在新的平板培养基上划线，划线完毕后，盖上培养皿盖，倒置于温室培养。培养一定时间后，重复一次，一直到分离的微生物认为纯化为止。 2.3.6 菌种保藏 超净台上无菌操作，用接种环挑取一环菌株置盛有1ml（VLB培养基︰V甘油=4︰1）的混合液的冻存管中，每种菌株保存三管，于-80℃的低温冰箱中保存。 3．试验结果 3.1 从源头进水口的水样中分离的菌落图见图1： 源头进水口A瓶重复一（反面） 源头进水口A瓶重复一（正面） 源头进水口A瓶重复二（反面） 源头进水口A瓶重复二（正面） 源头进水口B瓶重复一（反面） 源头进水口B瓶重复一（正面） 源头进水口B瓶重复二（反面） 源头进水口B瓶重复二（正面） 源头进水口C瓶重复一（反面） 源头进水口C瓶重复一（正面） 源头进水口C瓶重复二（反面） 源头进水口C瓶重复二（正面） 图1 源头进水口水样的菌落图 3.2源头进水口水样的菌株特征及数量描述 采用稀释涂板法对进入水质净化设备的源头进水口中的微生物进行了分离纯化，共得到11株菌株。见表1 表1 源头进水口的菌株 水样样品 菌株编号 特征 菌株含量（cfu） FJAT-11889 小，圆形，黄色，中心乳白色，偏湿，微隆，光滑，半透明，有光泽 10 源头入-3 极小，圆形，白色，偏湿，微隆，透明，有光泽，光