微生物与环境监测_培训课件.ppt

2.呼吸抑制试验（respiratiion inhibition test ） 微生物在进行有氧呼吸、分解有机质的过程中会消耗氧，产生CO2，因此测定呼吸速率可以反映活性污泥中微生物的代谢速率，对分析废水生物可降解性有重要意义。 废水中有毒物质可以抑制微生物的呼吸，使其耗氧量和CO2产生量下降，下降的程度与毒性物质的浓度和强度有关。 a b c d a：无毒，能被利用 b：无毒，不能被利用 c：有毒，能被利用 d: 有毒，不能被利用 基质浓度 污泥相对耗氧速率与废水毒性、可降解性的关系 100% 相对耗氧速率 特点： （1）简便：与哺乳动物的喂养相比，微生物培养繁殖易掌握和控制，检测方法也很简捷。 （2）灵敏：许多微生物的代谢活动对毒物干扰十分敏感，可以反映痕量毒物的效应。 （3）快速：微生物细胞的繁殖速度快，世代时间短，所以检测时间较哺乳动物试验短。 （4）经济：微生物菌株易于保藏、复苏，且许多检测手段已自动化，因此试验成本较低。 五、致突变性污染物的微生物检测 20世纪70年代 开始 环境致突变物（mutagen）、致癌物（carcinogen）的生物学试验 ； 1.鼠伤寒沙门氏菌/哺乳动物微粒体酶 （Ames试验） 美国Ames教授，1975年，致突变性测试法，也称Ames致突变试验。 检测DNA碱基序列是否发生改变即基因突变的一种方法。 原理： Ames试验利用鼠伤寒沙门氏菌（Salmonella typhimurium）的组氨酸营养缺陷型菌株发生回复突变的性能来检测物质致突变性的方法。 常用的组氨酸缺陷型沙门氏菌有5种，均各含有控制组氨酸合成的基因。当培养基中不含有组氨酸时它们不能生长。 当受到某些致突变物作用时，菌体内DNA特定部位发生基因突变而回复为野生型菌。培养基中不含有组氨酸时该菌也能生长。 哺乳动物微粒体酶： 混合功能氧化酶系，其中包括细胞色素P450、NADPH—细胞色素P450还原酶、细胞色素b5、NADH—细胞色素b5还原酶、芳烃经化酶、环氧化物水化酶及磷脂等 ； P450最为重要 ： 一是降解作用，使化学物变为低毒或无毒物排出； 二是激活作用，使化学物转化为具有亲电子性质，导致毒性增强，成为致突变物或终致癌物。 又称鼠伤寒沙门氏菌／哺乳动物微粒体试验法（Salmonella typhimurium / mammalian microsome test）。 2.发光细菌试验 利用发光细菌暗变异株恢复发光的现象，可对各种遗传毒性物质进行检测、筛选； 此方法与其他微生物学方法（如Ames试验）相比有灵敏、简便、快速等特点。 原理 发光细菌的自发暗变异株（K. variant）与致突变物接触后，则可恢复一定强度的发光能力（通常可使暗变异株的发光强度增加1000倍左右）。 3.营养缺陷型菌株回复突变试验 与Ames试验的原理与方法类似； 大肠杆菌与枯草芽孢杆菌进行的致突变试验。 大肠杆菌色氨酸营养缺陷型菌株 ：检查碱基置换型致突变物 ； 枯草芽孢杆菌蛋氨酸与组氨酸缺陷型菌株 4.细菌的正向突变试验 菌种：鼠伤寒沙门氏菌、枯草芽孢杆菌等。 枯草芽抱杆菌的芽孢形成试验即是其中一种。 正常的野生型枯草芽孢杆菌，是一种能产生芽孢的细菌，由于某种因素的影响使其发生突变，而变为不能形成芽孢的变异株。 该菌染色体中有25个以上的操纵子控制着芽孢形成，只要其中有任何一个发生变化，芽孢便不产生。 正常野生型的枯草芽孢杆菌菌落带棕黄色，而突变型菌株的菌落不产棕色素，因而可以通过肉眼鉴别出待测物是否为突变物。 5.粗糙脉孢菌的正向突变试验 粗糙脉孢菌（Neurospora crassa）基因组ad—3位点的正向突变 ； 在数量众多的白色菌落（野生型）中鉴定出紫红色的菌落（突变体）。 6.构巢曲霉的突变试验 构巢曲霉（Aspergillus nidulans）突变可通过菌落形态或营养要求的变化 无琉基黄嘌呤和含琉基黄嘌呤的培养基上，分别产生绿色菌落和黄色菌落。 7.SOS显色试验 检测理化因素所致细菌SOS修复的能力，来查明其是否具有致突变、致癌的特性。 8.重组缺陷型茵株试验 利用某些失去重组修复机能的菌株进行试验，其DNA受损后，由于不能重组修复而不能生长， 9.溶源性细菌试验 溶源性细菌（1ysogenic bacteria）含有温和噬菌体（或称溶源性噬菌体）的细菌。 在一般条件下在寄主菌体内不进入生长状态，而以一种特殊结构形式潜伏在细菌的染色体组内，称为原噬菌体（prophage）， 当细菌细胞经受到某些诱变剂作用时，，变成成熟的具感染性的噬菌体，使细菌发生裂解作用，最后使之解体而释出。 噬菌体的裂解作用在固体培养基上以噬菌斑的形式表现出来，噬菌斑愈多，诱变力愈强。 物质的致癌性与诱