酶工程学-第二三周生物合成理论.ppt

酶工程学 Enzyme Engineering 绪论(第一章) 第二章 酶生物合成的基本理论 第一节 RNA的生物合成——转录 一、中心法则 一、中心法则 二、RNA的生物合成——转录 （二）转录 （三）RNA聚合酶 （四）转录的起始 （六）转录的终止 （七）RNA前体的加工 第二节 蛋白质的生物合成——翻译 二、蛋白质的生物合成——翻译 第三节 酶生物合成的调节 3.肽链的延伸 GDP+Pi 4. 肽链的终止 终止密码子：UAA, UAG, UGA 释放因子（Release Factor）: RF-1：UAA, UAG RF-2：UAA, UGA 5.翻译后加工 去除甲酰基 去除N-末端的氨基酸 肽链折叠 转录水平的调节 转录产物的加工调节 翻译水平的调节 翻译产物的加工调节 酶降解调节 组成酶：细胞内含量恒定，环境因素对这些酶的合成效率影响不大。DNA聚合酶、RNA聚合酶、糖酵解途径的酶。 调节酶：在细胞内含量变化很大，合成速率明显受环境因素影响。 诱导酶：在诱导物作用下开始或加速合成。b－半乳糖苷酶 酶的类型 酶合成的调节控制 一、原核生物中酶生物合成的调节 1960年Jacob和Monod提出的操纵子学说 （一）操纵子学说 调节基因：产生阻遏蛋白 启动基因 操纵基因：与阻遏蛋白结合 结构基因：蛋白多肽链产物 操纵子 1.RNA聚合酶结合位点 2.cAMP及其受体蛋白复合物（cAMP-CRP）结合位点 操纵子学说主要内容 操纵子学说：操纵子（operon）是指启动基因、操纵基因和一系列紧密连锁的结构基因的总称，是转录的功能单位。很多功能上相关的基因前后相连成串，由一个共同的控制区进行转录的控制，包括结构基因以及调节基因的整个DNA序列。 * 酶的生产 酶的改性 酶的应用 酶生物合成的基本理论(第二章) 酶的生物合成法(第三章) 酶的提取与分离纯化(第四章) 酶改性的基本理论(第五章) 酶分子修饰(第六章) 酶固定化(第七章) 酶的非水相催化(第八章) 酶应用的基本理论(第九章) 酶反应器的应用(第十章) 酶的应用领域(第十一章) 酶的生物合成——通过细胞的生命活动而合成各种酶的过程。酶有蛋白类酶（P酶）和核酸类酶（R酶）两大类别，酶的生物合成主要是指细胞内RNA和蛋白质的合成过程。 1958年 Crick： 1958年 Crick： ？ 发现逆转录病毒（1970） 朊粒 羊瘙痒症 水貂脑软化病 马鹿和鹿的慢性消瘦病 猫的海绵状脑 疯牛病 克雅氏综合症 1976年，美国，Gajdusek，诺贝尔生理学和医学奖 1997年，美国，Prusiner，诺贝尔医学或生理学奖 WM＝分子量在2.7万～3万  朊病毒：又称蛋白质侵染因子（又称毒阮）。朊病毒是一类能侵染动物并在宿主细胞内复制的小分子无免疫性疏水蛋白质。 复制机理 ： 合成朊病毒所需的信息，有可能是存在于寄主细胞之中的，而朊病毒的作用，仅在于激活在寄主细胞中为朊病毒的编码的基因，使得朊病毒得以复制繁殖。 朊病毒的蛋白质能为自己编码遗传信息。 逆转译 蛋白质本身可作为遗传信息 3. 1982年Prusiner提出了朊病毒致病的“蛋白质构象致病假说” 1. 以“DNA”为“中心”的中心法则解读 2. 以“RNA”为“中心”的中心法则解读 （1）不具有逆转录行为的RNA病毒的中心法则之解读 （2）具有逆转录行为的RNA病毒的中心法则之解读 RNA的种类 dsRNA:某些病毒遗传信息载体 催化活性RNA：催化作用 tRNA：氨基酸载体 rRNA：与蛋白质共同组成核糖体 mRNA：蛋白质合成模板 sRNA：分子修饰、代谢调节作用 （一）RNA的种类和主要功能 以DNA为模板，以核苷三磷酸为底物，在依赖DNA的RNA 聚合酶作用下，生成RNA的过程。 RNA+4nPPi nATP nGTP nCTP nUTP DNA模板，Mg2+/Mn2+ RNA聚合酶 大肠杆菌RNA聚合酶：MW=5x105 全酶：由β β’ α ω σ组成，识别转录起始位点，与DNA上的启动基因结合，使转录开始。 核心酶：由β β’ α ω组成，进行核苷酸链的延伸。 1960年， Harowitz和Weiss 真核生物RNA聚合酶：三种 tRNA 5SrRNA mRNA rRNA 催化反应产物 600 600 550 相对分子质量/103 核质 核仁 核仁 存在位置 小分子RNA聚合酶 不均一RNA聚合酶 rRNA RNA聚合酶 别名 RNA聚合酶III RNA聚合酶II RNA聚合酶I 聚合酶种类 RNA生物合成的起始位点在DNA的启动基因（启动子)上 起始阶段的重要问题是RNA聚合酶与DNA的启动基因的相互作用，起始阶段包括： 全酶的形成 酶与模板结合 酶与启动基