血红蛋白的提取与分离分解.pptVIP

①调整缓冲液面：与凝胶面平齐。 ②滴加透析样品：用吸管将1mL透析后的样品加到色谱柱的顶端。 ③样品渗入凝胶床：样品完全进入凝胶层。 ④洗脱：打开下端，用磷酸缓冲液洗脱。 ⑤收集：待红色的蛋白质接近色谱柱底端时，用试管收集流出液，每5mL收集一试管，连续收集。 3.SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳（选做） 判断纯化的蛋白质是否达到要求，需要进行蛋白质的鉴定。 血红蛋白是有色蛋白，因此在凝胶色谱分离时可以通过观察颜色来判断什么时候应该收集洗脱液。这使血红蛋白的分离过程非常直观，大大简化了实验操作。 思考： 与其他真核细胞相比，红细胞有什么特点？这一特点对你进行蛋白质的分离有什么意义？ 3.SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳 ——鉴定血红蛋白纯度 （1）试剂的配制 ①丙烯酰胺和N, N-甲叉双丙烯酰胺? 用去离子水配制29%（29 g/100 mL，下同）的丙烯酰胺和1%的N, N-甲叉双丙烯酰胺的贮存液 ②十二烷基硫酸钠（SDS）? 用去离子水配成10%的贮存液，于室温保存。 ③用于制备分离胶和浓缩胶的Tris缓冲液 ④ TEMED ：作用通过催化过硫酸铵形成自由基而加速丙烯酰胺与双丙烯酰胺的聚合。 ⑤用去离子水配制10% 过硫酸铵：作用提供驱动丙烯酰胺和双丙烯酰胺聚合所必需的自由基。此溶液须配制新鲜液。 ⑥Tris—甘氨酸电泳缓冲液?