第十二章核酸的生物合成22 RNA的生物合成1.pptVIP

第二节 RNA的生物合成 一、概念 转录： 转录的不对称性：在RNA的合成中，DNA的二条链中仅有一条链可作为转录的模板，称为转录的不对称性。 反义链（无意义链，负链）：在RNA的转录中，用作模板的DNA链称为反义链。 有义链（编码链，正链）在RNA的转录中，不作为模板的DNA链称为有义链。 二、RNA聚合酶：大肠杆菌的RNA聚合酶全酶由5种亚基α2ββ’σ 组成，σ因子与其它部分的结合不是十分紧密，没有σ亚基的酶称为核心酶——只催化链的延长，对起始无作用。 σ亚基：识别起始位点。 三、RNA的转录过程：（以大肠杆菌为例） 起始位点的识别 转录起始 链的延伸 转录终止 四、RNA生物合成的抑制剂(了解) 1、嘌呤和嘧啶类似物：人工合成的碱基类似物能够抑制和干扰核酸的合成。如 2、DNA模板功能的抑制物:可以与DNA模板结合，抑制其复制和转录 （1）烷化剂 （2）放线菌素 （3）嵌入染料：溴化乙锭（EB）与DNA结合后抑制其复制和转录。 3、RNA聚合酶抑制物（掌握） （1）利福平素：抑制原核生物RNA聚合酶活性。 （2）?-鹅膏蕈碱：抑制真核。 五、RNA的转录后加工 由RNA聚合酶合成的原初转录物往往需要一系列的变化，才转变为成熟的RNA分子。此过程总称为RNA的成熟或称为RNA的转录后加工。 1、mRNA前体的加工： 原核生物一般不需要加工。 真核生物mRNA原初转录物很大，在加工过程中形成许多分子大小不等的中间物，称为核内不均一RNA（hnRNA)，需要进一步进行加工修饰转化为mRNA。加工包括： （1）hnRNA被剪接，剪掉内含子，拼接外显子。 （2）3’端添加polyA “尾巴”； （3）5’端连接“帽子”结构（m7G5?ppp5?NmpNp-）； （4）核苷酸甲基化修饰。 * * 真核细胞的RNA聚合酶 酶类 分布 产物 α-鹅膏蕈碱 对酶的作用 分子量 反应条件 Ⅱ I Ⅲ 核仁 核质 核质 rRNA 5.8SrRNA 18SrRNA 28SrRNA mRNA tRNA 5SrRNA 不抑制 低浓度抑制 高浓度抑制 500 000 ~700 000 ~700 000 _ 低离子强度,要求Mg2+或Mn2+ 高离子强度 高Mn2+浓度 RNA聚合酶的特点： 1、反应底物：NTP，DNA为模板、Mg2+促进聚合反应。 RNA聚合酶不需引物，合成方向5??3 ?。 2、真核生物与原核生物的RNA聚合酶结构不同。 3、利福平抑制原核、α-鹅膏蕈碱 抑制真核生物RNA聚合酶活性。 （1）起始位点的识别 不需要引物。σ亚基起着识别DNA分子上的起始信号（启动子——指RNA聚合酶识别、结合和开始转录的一段DNA序列）的作用。启动子的结构至少由三部分组成：-35序列提供了RNA聚合酶全酶识别的信号；-10序列是酶的紧密结合位点（富含AT碱基，利于双链打开）；第三部分是RNA合成的起始点。 AACTGT ATATTA TTGACA TATAAT +1 转录起始点 5’ 3’ 3’ 5’ 35序列 Sextama 框 10序列 Pribnow框 （2）转录起始 RNA聚合酶全酶扫描解链区，找到起始点，然后结合第一个核苷三磷酸。加入的第一个核苷三磷酸常是GTP或ATP。所形成的启动子、全酶和核苷三磷酸复合物称为三元起始复合物，第一个核苷三磷酸一旦掺入到转录起始点， σ亚基就会被释放脱离核心酶。 ?因子仅与起始 有关，RNA的合 成一旦开始， 便被释放 ? E -35 -10 pppG或pppA 5‘ 5‘ 3‘ 3‘ 模板链 （3）RNA链的延伸 核心酶与DNA结合比较松弛，可沿DNA模板移动，并按模板顺序选择下一个核苷酸，将核苷三磷酸加到生长的RNA链的3’-OH端，催化形成磷酸二酯键。延伸方向从5’ ?3’ （4）转录终止 在DNA分子上（基因末端）提供转录停止信号的DNA序列称为终止子（terminators),它能使RNA聚合酶停止合成RNA并释放出RNA。 需要ρ因子（终止因子，协助RNA聚合酶识别终止信号）帮助。 NH2 SH SH 作为代谢拮抗物抑制 合成酶类或直接掺到核酸 分子中，形成异常RNA 或DNA。 NH2 NH2 OH N F NH2 SH 2、tRNA前体的加工： 原核与真核生物的tRNA转录后都需要加工。包括： （1）切除前体上3?和5?端上多余的核苷酸； （2）3’端添加CCAOH序列。 （3）一些特定的碱基和戊糖进行修饰。 原核与真核生物的rRNA转录后也都需要进行