生物实验操作3教程分析.ppt

Contents 实验目的 实验原理 实验器材及材料 实验操作 注意事项 实验目的 1.掌握盐析沉淀法提取鸡蛋卵清蛋白的方法 2.掌握卡马斯亮蓝G250反应测定蛋白质活性的方法 实验原理 1.盐析沉淀法 蛋白质溶于水是因为蛋白质分子中的亲水基团(如－COOH、－NH2和－OH)与极性水分子相互作用，形成水化层削弱了蛋白质分子之间的作用力，使得蛋白质分子与溶剂分子之间的亲和力越大，因而溶解度也越大较易溶于水。中性盐对水分子的亲和力大于蛋白质，当加入大量的中性盐，高浓度的盐离子在蛋白质溶液中可与蛋白质竞争水分子，从而破坏蛋白质表面的水化膜，降低其溶解度，使之从溶液中沉淀出来。各种蛋白质的溶解度不同，因而可利用不同浓度的盐溶液来沉淀不同的蛋白质。这种方法称之为盐析。硫酸铵因其溶解度大，温度系数小和不易使蛋白质变性而应用最广。 实验原理 实验原理 2.考马斯亮蓝反应 蛋白质的活性测定可采用双缩脲反应、茚三酮反应、考马斯亮蓝反应等。双缩脲反应中，除了蛋白质，二肽以上的多肽、硫酸铵也可干扰此反应，灵敏度较差；茚三酮反应虽灵敏，但与其发生显色反应的并不一定是蛋白质，还可能是一些氨基酸。考马斯亮蓝染色灵敏度高，速度快，酸性环境中其游离态呈棕红色，当与蛋白质通过疏水作用结合后成蓝色，在0.01-1.0mg蛋白质范围内，蛋白质与其染色后的吸光值A959nm成