心脑血管药理、食管癌放疗增敏研究Cell_Death_BW中文.ppt

凋亡是细胞死亡的原因和形式 早期凋亡：凋亡是细胞死亡的原因－它是细胞死亡的最敏感模式，影响凋亡的基因也影响细胞死亡－如某些淋巴瘤和白血病 延迟凋亡：通常细胞死亡的原因为有丝分裂失败。然而细胞死亡不一定通过凋亡这种形式。改变细胞凋亡敏感性并不改变总体的细胞死亡－如大多数上皮肿瘤。 细胞死亡的原因 ? 早期细胞死亡 (凋亡，坏死， 衰老，自噬) DNA损伤 效应 有丝分裂失败 晚期细胞死亡 (凋亡，坏死， 衰老，自噬) 克隆性 存活 Endlich et al (2000) 两种死亡类型－有丝分裂前与后死亡 启动凋亡进程细胞 的累积百分比 照射后时间（h） 进程时间（从膜起泡到细胞萎陷） 进程时间（从分裂到细胞萎陷） 凋亡的变化未影响HCT116肿瘤细胞克隆原性存活(Brown Wouters, 1999) 凋亡差异 细胞死亡方式能显著影响细胞死亡速率 众多临床、临床前研究的总结 早期凋亡不是实体瘤细胞的杀伤机制 实体瘤细胞可能死于凋亡，主要是通过有丝分裂后（延迟的）凋亡所致 对有丝分裂后凋亡的调节通常并不改变总体细胞死亡 (Brown and Attardi, Nat Rev Cancer, 5: 232, 2005) 是电离辐射后细胞死亡的主要形式 几乎所有死亡都发生在细胞试图分裂后 有丝分裂失败 有丝分裂失败是细胞死亡的决定性因素 细胞死亡多发生在放射后的一段相对较长的时间里（在DNA修复完成后） 在放射后的许多年后才观察到放射的晚反应（慢增殖组织） 改变DNA修复能力能影响放射敏感性 组织对再次放射敏感（细胞此时还未死亡） 凋亡和其他测定细胞死亡的方法与治疗效应的相关性不大 对众多实验观察的解释！ 结 论 1）多数细胞死亡受某种方式的调控或编程 主要的路径包括凋亡，衰老，自噬和坏死 2）遗传学改变能戏剧性改变细胞死亡方式，但并不改变细胞是否死 亡的命运 3）大部分细胞放射后死亡缘于有丝分裂失败而非放射所致的初损伤 增殖很慢的细胞可能在放射后较长时间才死亡 * * * * * Caspase 8 – caspase 3 * * “we look ahead 10 or 20 years to the time when the diagnosis of all the somatically acquired lesions present in a tumor cell genome will become a routine procedure. It will become possible to test definitively our proposition that the development of all types of human tumor cells is governed by a common set of rules such as those implied by the six acquired capabilities enumerated here.” * * * * * * * * * 细胞死亡的分子学基础 Bradly G. Wouters Ontario Cancer Institute Princess Margaret Hospital Toronto, Canada bwouters@uhnresearch.ca 细胞死亡是什么意思？ 细胞死亡—放射生物学 丧失复制（克隆）的能力 细胞表现或不表现为死亡 细胞对肿瘤的生长和转移不起作用—治疗目的所在 对于正常细胞, 没有相应的定义 没有“非分裂细胞”的含义 区别定义可能更好 细胞怎样死亡? 细胞怎样死亡? – 凋亡 电镜：SA-β-gal染色；生长阻滞检测；P53增高，INK4A和A RF水平（通常增高）分析检测；RB磷酸化分析（通常为低磷酸化）；金属蛋白酶活性分析 SA-β-gal 活化 变平与颗粒增多 － 显著的异染色质结构（衰老相关的异染色质聚合物） 衰老 电镜：核染色（通常阴性）；邻近组织炎症与损伤 － 空泡增多；细胞器裂解；线粒体溶胀 肿胀；破裂 核蛋白聚积成团和随机降解 坏死 电镜：有丝分裂标志物（MPM2）分析；TUNEL染色 Caspase非依赖（早期）；CDK1/cyclinB活化异常 － － 多个微核；核碎片化 有丝分裂失败 电镜：蛋白降解分析；自噬膜转位标志蛋白分析；MDC染色 Caspase非依赖；溶酶体活性增高 吞饮小囊泡增多 起泡 部分染色质凝聚；无DNA梯状条带 自噬 电镜：TUNEL染色；膜连蛋白染色；Caspase活性检测；DNA片段检测；检测G1/G0亚期细胞数目增多；检测线粒体膜电位 Caspase依赖 裂解（形成凋亡小体） 起泡 染色质凝聚；核碎片