药学中的生物技术和方法2015-3-抗体和免疫探讨.pptVIP

CaN CaM:La3+ HRP StreptAvidin Biotin RIA Assay 免疫竞争结合分析---小分子抗原分析的基本方法 Ag + Ab AgAb + Ag + * Ag * AgAb + * Ag [*AgAb: Precipitant↓] 放射性计数 常用分离沉淀技术 盐析法：饱和硫酸铵、硫酸钠 聚乙二醇法（w=6000） 特点： 快速，价廉，来源方便，受环境影响大 抗体免疫沉淀法 特点： 分离完全，非特异结合小，环境影响小，效价高，但成本高 固相吸附剂 RIA测量步骤 恒量的* Ag、Ab加入反应管中 加入待测样品、或标准品（已知浓度） 37℃或4 ℃温育 加入分离剂分离结合及游离部分 测定以总放射性为分母，测定* AgAb 为分子，计算结合%，以结合率为纵坐标，浓度为坐标，制作标准曲线 待测样品的结合率从标准曲线上求出浓度 Calibration curve ELISA（Enzyme Linked ImmunoSorbent Assay） Sandwich ELISA 竞争法（略） High Convenience High Sensitivity 96-well plate 包被 封闭 结合 显色 酶标仪测定 hv 洗涤 洗涤 洗涤 终止 酶的