用多结合性阴子交换剂去除MAb污染.docVIP

用多结合性阴离子交换剂去除MAb污染 GE Healthcare最近推出的Capto adhere多结合性阴离子交换树脂对蛋白A分离后残留的污染物具有高选择性，只需增加一个步骤，就能实现高效的单克隆抗体下游工艺开发。蛋白A树脂捕获后的高纯度，再加上Capto adhere树脂的多结合性功能，构成了高产的两步工艺。  在目前正在开发中的生物制药产品中，单克隆抗体（MAb）大约占了三成(1)。过去几十年对单克隆抗体需求的持续增长导致了高表达细胞培养技术的密集开发(2)。时至今日， 4-5 g/L的产率已不足为奇，表达水平高达15 g/L甚至更高也时有报道。因此，对更高效下游处理工艺的需求也随之不断增长。这种需求，再加上缩短上市时间的潜力，让人们对单克隆抗体生产（上游及下游）的通用平台技术更加感兴趣。现在许多单克隆抗体生产厂家都开始采用这种方法。 目前为止，几乎所有获批准的单克隆抗体工艺都包含一个蛋白A的捕获步骤。在常规步骤中，蛋白A树脂直接从澄清的细胞培养物上清中捕获单克隆抗体，它的高选择性使之可高产量地获得很高纯度的产物。因此，蛋白A为大多数单克隆抗体以通用平台技术进行下游处理的成功奠定了基础。 最近推出的Capto adhere多结合性阴离子交换树脂对蛋白A分离后残留的污染物具有高选择性，只需增加一个步骤，就能实现高效的单克隆抗体下游工艺开发(3)。蛋白A树脂捕获后的高纯度，再加上Capto adhere树脂的多结合性功能，构成了高产的两步工艺(4,5)。单克隆抗体平台工具箱 平台技术包含一系列以性质相似的同类分子的纯化经验为基础的单元操作、方法及条件(6-10)。已有20多种获批准的产品以及160多种还在临床试验中的单克隆抗体，正是这样一类分子(1)。所有单克隆抗体生产平台技术的基础，正是蛋白A的独特选择性。 平台技术能实现快速而经济的工艺开发和放大。通过缩短开发时间，它将有助于众多候选药物通过开发实验室。采用高度类似的通用平台技术也将令从研发到生产之间的工艺转换更加可靠、更加顺利。 由于单克隆抗体类似但不相同，它们的平台也就不能在细节上完全固定，必须要灵活。因此，蛋白A步骤后的层析步骤可能在次序上有所改变，或工艺间存在微小的差异。为此，可以采用工具箱的概念（图1）来建立有效的单克隆抗体纯化工艺。 HYPERLINK /bbs/attachment.php?aid=MTM2fGU1ZjU1OTVlfDEyNzk1ODk5NTh8MWVlMm9WSW1MOWdWSm56TWJzSXh0ZW5TWUlqRUZJM01iNFlOZlZuN01wYnA0cmM%3Dnothumb=yes \t _blank \o 2009032016014583.jpg 图1：单克隆抗体层析树脂工具箱*WO 2004/485，Lonza专利应用，与一个包括蛋白A处理后进行阴离子交换层析的工艺相关。 为了获得最佳结果，优化单克隆抗体工艺的每个步骤是非常重要的，包括蛋白A捕获步骤。我们推荐的平台包括用MabSelect SuRe蛋白A树脂进行捕获，尽管MabSelect和MabSelect Xtra系列在单克隆抗体纯化平台上效果也很好。MabSelect SuRe产品包含耐碱性的、源自蛋白A的配基，可以耐受0.1-0.5 M NaOH作为在位清洗（CIP）的试剂，因此比其他蛋白A树脂具有更长的使用寿命(11,12)。就蛋白水解而言，这种配基比常规（天然或重组）的蛋白A配基更稳定，从而进一步减少了配基脱落。此外，对于多种单克隆抗体和Fc融合蛋白，配基不与Fab结合意味着允许更广泛的洗脱条件如pH(13)。以上种种都促进了通用平台技术的推广。以MabSelect SuRe为代表的蛋白A树脂所具有的独特选择性使得两步层析工艺成为可能。这些工艺已有报道(14,15)。多结合性阴离子交换剂 通用电气医疗集团的Capto adhere阴离子交换剂提供专为单克隆抗体工艺中蛋白A捕获后纯化而设计的多种结合功能。蛋白A捕获后的产物穿流（flow-through）通过Capto adhere树脂，残留在产品中的污染物结合在Capto adhere树脂而被去除。图2展示了Capto adhere配基：N-苯甲基-N甲基乙醇胺。此配基显示多种不同的相互作用模式，最主要是离子相互作用。但其他形式的相互作用如氢键和疏水作用也有参与。 HYPERLINK /bbs/attachment.php?aid=MTM3fGNmNGNkZTg2fDEyNzk1ODk5NTh8MWVlMm9WSW1MOWdWSm56TWJzSXh0ZW5TWUlqRUZJM01iNFlOZl