9氨基酸发酵生产工艺学n.pptVIP

第十二章 氨基酸生产工艺 氨基酸是构成蛋白质成分 目前世界上可用发酵法生产氨基酸有20多种。 氨基酸的用途 1.食品工业（66%）： 强化食品(赖氨酸，苏氨酸，色氨酸于小麦中) 增鲜剂：谷氨酸一钠和天冬氨酸 苯丙氨酸与天冬氨酸可用于制造低热量二肽甜味剂(α-天冬酰苯丙氨酸甲酯)，此产品1981年获FDA批准，现在每年产量已达数万吨。 2.饲料工业（30%）： 甲硫氨酸等必需氨基酸可用于制造动物饲料 3.医药工业： 多种复合氨基酸制剂可通过输液治疗营养或代谢失调 苯丙氨酸与氮芥子气合成的苯丙氨酸氮芥子气对骨髓肿瘤治疗有效，且副作用低。 4.化学工业：月桂酰基谷氨酸钠作洗涤剂，丙氨酸制造丙氨酸纤维。 氨基酸的生产方法 发酵法： 直接发酵法：野生菌株发酵、营养缺陷型突变发酵、抗氨基酸结构类似物突变株发酵、抗氨基酸结构类似物突变株的营养缺陷型菌株发酵等。 添加前体法 前体是指加入到发酵培养基中的某些化合物，它能被微生物直接结合到产物分子中去，而自身的结构无多大变化，有些还有促进产物合成的作用。 中间体是指养分或基质进入一途径后被转化为一种或多种不同的物质，它们均被进一步代谢，最终获得该途径的终产物。 诱导物是指那些在生长期内促进生物合成的化合物。 酶法：利用微生物细胞或微生物产生的酶来制造氨基酸。 合成法：DL-蛋氨酸、丙氨酸、甘氨酸、苯丙氨酸。 传统的提取法：酶法和化学合成法由于前体物的成本高，工艺复杂，难以达到工业化生产的目的，蛋白质水解，从水解液中提取，胱氨酸、半胱氨酸和酪氨酸。 氨基酸发酵生产发展现状 生产氨基酸的大国为日本和德国。 日本的味之素、协和发酵及德国的德固沙是世界氨基酸生产的三巨头。它们能生产高品质的氨基酸，可直接用于输液制剂的生产。 日本在美国、法国等建立了合资的氨基酸生产厂家，生产氨基酸和天冬甜精等衍生物。 80-90年代国内生产氨基酸的厂家主要是天津氨基酸公司，湖北八峰氨基酸公司，但目前无论生产规模及产品质量还难于与国外抗衡。 在80年代中后期，我国从日本的味之素、协和发酵以技术合作的方式引进输液制剂的制造技术和仿造产品，1991年销售量为二千万瓶，1996年达六千万瓶，主要厂家有无锡华瑞，北京费森尤斯，昆明康普莱特，但生产原料都依赖进口。 氨基酸发酵生产发展的历史回顾 所谓氨基酸发酵，就是以糖类和铵盐为主要原料的培养基中培养微生物，积累特定的氨基酸。 这些方法成立的一个重要前提是使用选育成的氨基酸生物合成高能力的菌株。 从自然界中筛选有产酸能力的菌株，并建立其培养条件。 在确立突变技术和阐明氨基酸生物合成系统调节机制的基础上发展为营养缺陷变异株、抗药性菌株的育种。 随着重组DNA技术的发展，氨基酸生物工程菌的构建有了长足的发展，苏氨酸等的生产菌株被成功地构建并应用于工业化生产。 2.1　用野生株的方法 这是从自然界获得的分离菌株进行发酵生产的一种方法。 典型的例子就是谷氨酸发酵。 改变培养条件的发酵转换法中，有变化铵离子浓度、磷酸浓度，使谷氨酸转向谷氨酰胺和缬氨酸发酵 采样：要有针对性，根据菌种的特性、环境条件、菌种的生态及已有的一些经验进行采样。 增殖培养：增加细胞数量的一个技术。 纯种分离（平板分离）：平板分离的目的是得到纯的菌株以便进一步筛选。一般取土样制成悬浮液，稀释到10-3—10-5左右，平板划线，平板培养时可加一些药剂抑制霉菌及其他微生物的干扰，分离的培养基一般用0.1%葡萄糖的普通肉汤培养基。 初筛：是把平板分离得到的菌株，进行初步筛选，从中挑选菌株。一般用摇管试验，它的特点是能适应较大规模的试验工作，每批能进行几十甚至成百个菌株的试验，结果比较可靠，产酸可用纸层析法测定。 复筛：将初筛得到的菌株进一步试验，观察其生产能力，同时摸索其发酵的最佳工艺条件及最佳培养基配比，复筛一般用摇瓶试验，中途测定pH。 发酵试验：进一步验证摇瓶试验的结果，并确定工艺条件，新菌种如确定有实用价值后，就要测定菌种的细胞形态、培养形态、生理生化特征，确定新菌株的名称。 2.2　用营养缺陷变异株的方法 这一方法是诱变出菌体内氨基酸生物合成某步反应阻遏的营养缺陷型变异体，使生物合成在中途停止，不让最终产物起控制作用。 这种方法中有用高丝氨酸缺陷株的赖氨酸发酵，有用精氨酸缺陷株的鸟氨酸发酵，还有用异亮氨酸缺陷株的脯氨酸发酵。 2.3　类似物抗性变异株的方法 用一种与自己想获得的氨基酸结构相类似的化合物加入培养基内，使其发生控制作用，从而抑制微生物的生长。这样，就可以得到在这种培养基中能够生长的变异株，而这种变异株正是解除了调控机制的，能够生成过量的氨基酸。 利用此方法发酵的有:苏氨酸、赖氨酸、异亮氨酸、组氨酸和精氨酸。 2.4 体内及体外基因重组的方法 体内基