转基因工程复习题与讲义.doc

基因工程原理复习题思考题 基因工程的定义与特征。 2、试述基因工程的主要研究内容。 3、基因工程在食品工业上有何应用发展？ 4、转基因是一把双刃剑，请客观谈谈对转基因及转基因食品安全性的认识。 原核生物和真核生物的基因表达调控有何差别？ 什么是基因？根据基因的产物，基因可分为哪三类？ 引起核酸变性的因素主要有哪些？核酸变性后性质有何变化？ DNA复性及其影响因素。 DNA凝胶电泳中核酸分子分离的机理。 DNA凝胶电泳中影响电泳迁移率的因素主要有哪些？ PCR的原理和主要反应过程，并分析影响PCR扩增的影响因素。 PCR引物设计的原则，若给一指定DNA序列并需要通过PCR扩增此序列，如何设计扩增引物？ 定量PCR的原理？Ct值的含义。 分子杂交的类型主要有哪些？探针的标记方法与标记类型？常用的双链DNA的标记方法是哪两种？ Southern杂交一般过程及影响杂交因素。 基因组文库的构建过程？如何确定文库的大小？ 基因文库的类型包括哪两种？各有什么特点？ 一般质粒DNA的构型有哪几种？在琼脂糖凝胶电泳中的有何特点？ 碱裂解法提取质粒DNA的原理，分析影响试验结果的各种可能因素。 电泳缓冲液使用一定时间后出现DNA在凝胶中跑不动现象的原因，有何解决办法？ 电泳的指示剂和染色剂有何区别，各自的作用是什么？ 1限制性核酸内切酶的类型，基因工程常用的是哪种限制性核酸内切酶？ 2什么是星活性，产生星活性的因素可能有哪些？ 3结合已做的实验，分析影响酶切的因素。 4限制性核酸内切酶命名规则及各字母代表的含义。 5简单叙述同尾酶和同裂酶的差别。 6连接酶主要有哪些类型？有何异同点？影响连接酶连接效果的因素主要有哪些？ 7试分析提高平端DNA连接效率的可能方法。 8基因工程中常用的DNA聚合酶主要有哪些？ 作为基因工程载体，其应具备哪些条件？ 质粒的不相容性及其分子机理。 载体的类型主要有哪些？在基因工程操作中如何选择载体？ 质粒转化原理，影响转化率的因素有哪些？ 5重组体分子的选择方法主要有哪些？并简单阐述其原理 基因的克隆方法主要有哪些？并阐述其克隆原理（至少3种，都是书上找的，自选哈，建议必选DD RT-PCR和SSH，原因请看下题） 2、简单阐述差异显示PCR克隆基因的原理及其优缺点，有何应用？ 3抑制性差减杂交的原理与应用。 4酵母双杂交技术、噬菌体表面展示技术的原理。 5、T-DNA标签法克隆基因的一般技术路线。 1、通过比较，分析大肠杆菌表达系统和酵母表达系统各有何优缺点。 2、如何提高克隆基因的表达水平？ 3、克隆基因目的蛋白的表达的形式主要有哪些类型？ 4、启动子从转录模式上可分为哪两种？表达系统常选用哪一种？其机理是什么？ 表达载体和基因工程一般克隆载体在元件构成上有何差别？ 根据表达蛋白用途的不同，设计选择基因的表达策略。 1、什么叫转基因植物？植物转基因技术的基本路线主要包括哪些？ 2、外源基因导入植物的方法主要有哪些？ 3、运用已学的知识，如何全面分析获得的转基因个体（提示：包括外源基因是否整合，被插入位点分析，外源基因是否表达，表达量如何？等） 4、出现转基因沉默现象的可能原因分析。 基因工程绪论 1、基因工程的定义与特征。 定义：在体外把核酸分子（DNA的分离、合成）插入载体分子，构成遗传物质的新组合（重组DNA），引入原先没有这类分子的受体细胞内，稳定地复制表达繁殖，培育符合人们需要的新品种（品系），生产人类急需的药品、食品、工业品等。 特征：1、具跨越天然物种屏障的能力。 2、 强调了确定的DNA片段在新寄主细胞中的扩增。 2、试述基因工程的主要研究内容。 1）、目的基因的分离 2）、DNA的体外重组（载体、受体系统等） 3）、重组DNA分子转移到受体细胞及其筛选 4）、基因在受体细胞内的扩增、表达、检测及其分析。 3、基因工程在食品工业上有何应用发展？ 主要是通过基因重组，使各种转基因生物提高生产谷氨酸、调味剂、酒类和油类等有机物的产率；或者改良这些有机物组成成分，提高利用价值。 4、转基因是一把双刃剑，请客观谈谈对转基因及转基因食品安全性的认识。 转基因技术所带来的好处是显而易见的，在人类历史进步和发展中起到了积极作用。 首先，通过该项技术可以提供人们所需要的特性，改良培育新品种； 第二，延长食品保存时间或增加营养成分； 第三，将抗虫防菌基因转入到作物中，使作物本身产生抵抗病虫害侵袭的能力， 减少了农药的使用量，有利于环境保护； 第四，转基因技术及基因食物在医学方面得到广泛研究和应用。 人们对转基因技术的主要担忧在于环境方面。外源基因的导入可能会造就某种强势生物， 产生新物种或超级杂草、损害非目标生物、破坏原