0蛋白质的合成过程课件.pptVIP

（七）多肽合成后的定向输送及转译后加工 * 二 . 蛋白质的合成过程（大肠杆菌） 氨基酸的活化 肽链合成的起始 肽链的延伸 肽链合成的终止与释放 蛋白质合成的机制要比DNA复制和转录复杂的多。它大约需要300多种生物大分子，其中包括三类核糖核酸、可溶性蛋白质因子等参加的协同作用。其合成过程大致分为5个阶段：氨基酸的激活、肽链合成的启动、肽链的延长、肽链合成的终止和释放、肽链的折叠和加工处理。 （一）氨基酸的活化与转运 氨基酸在掺入肽链之前必须活化（activition）以获得额外的能量。活化反应是在氨酰-tRNA合成酶（aminoacyl-tRNA synthetase）催化下进行的。活化了的氨基酸与tRNA形成氨酰-tRNA。这一反应可在可溶性细胞质内完成。活化反应分两步进行： 1、氨基酸-AMP-酶复合物的形成：反应如下： ATP+氨基酸+酶——→氨基酸-AMP-酶+PPi 反应需要Mg2+或Mn2+，并且是ATP水解释放能量供复合物的形成。在复合物中，氨基酸的羧基通过酸酐键与AMP上的5’-磷酸基相连接,形成高能酸酐键,从而使氨基酸的羧基得到活化。 2、氨基酸从复合物上面转移到相应的tRNA上面： 氨基酸-AMP-酶+PPi ——→氨酰-tRNA+AMP+酶 1、 活化 ： AA-AMP-E复合物的形成 E-CR1-C-O ~P-O- CH2 = O OH - O 腺嘌呤 OH OH O NH2 AA+ATP+E AA-AMP-E +PPi Mg 2+ Mn 2+ 2、 转移 AA-AMP-E+ tRNA 氨酰-tRNA +AMP+E P P P C C A 高能酸苷键 O C-C-R O H NH3 + OH 2?-OH连接AA，影响下一步 肽键形成 氨基酸活化的总反应式是： 氨基酸+ATP+tRNA +H2O ??氨酰-tRNA+AMP+PPi 20种氨基酸中每一种都有各自特异的氨酰-tRNA合成酶。氨酰-tRNA合成酶具有高度的专一性，它既能识别相应的氨基酸（L-构型），又能识别与此氨基酸相对应的一个或多个tRNA 分子；即使AA识别出现错误，此酶具有水解功能，可以将其水解掉。这种高度的专一性保证了氨基酸与其特定的tRNA准确匹配，从而使蛋白质的合成具有一定的保真性。 氨酰-tRNA 合成酶 tRNAIle——携带Ile的tRNA Ile- tRNAIle——异亮氨酰-tRNAIle 氨酰-tRNA合成酶和之相对应的tRNA分子被称为遗传密码第二重要性 （二）大肠杆菌中肽链合成的起始 1、起始密码子（起始信号）：细菌中多肽的合成并不是从mRNA5’端的第一个核苷酸开始的。被转译的头一个密码子往往位于5’端的第25个核苷酸以后。mRNA上的起始密码子常为AUG，少数情形下也为GUG。 对起始密码子附近的核苷酸序列进行分析后发现，在距离起始密码子上游约10个核苷酸的地方往往有一段富含嘌呤的序列（称为Shine-Dalgarno序列，简称SD序列）。它与16SrRNA3’端的核苷酸序列形成互补。 下图为一些原和生物的SD序列和SD序列于16SrRNA3’端片段之间的互补关系： 现在已经知道作为多肽合成起始信号的密码子有两个，即甲硫氨酸的密码子(AUG)和缬氨酸的密码子(GUG)(极少出现)。在大肠杆菌中, 起始密码子AUG 所编码的氨基酸并不是甲硫氨酸本身, 而是甲酰甲硫氨酸。 fMet-tRNAf的形成 Met-tRNAf + N10-甲酰FH4 fMet-tRNAf + FH4 甲酰化酶 真核生物：Met-tRNAMet。真核生物无甲基化过程，起始氨基酸是Met,起始tRNA为Met-tRNAMet fMet-tRNAifMet 2、起始复合物的形成：原核细胞中的起始氨基酸是甲酰甲硫氨酸，而不是甲硫氨酸，它是在甲酰化酶作用下形成的。但需注意的是这种酶只能催化甲硫氨酸-tRNAf转化为甲酰甲硫氨酸-tRNA(fMet-tRNA），而不能催化游离的甲硫氨酸或Met-tRNAm的甲酰化。这就是说细胞内有两种携带甲硫氨酸的tRNA。即tRNAf用来与fMet相结合，参与原核生物肽链的合成的起始；而tRNAm携带正常的甲硫氨酸掺入肽链。 起始复合物的形成可分三个步骤进行：首先始30S的亚基与起始因子3（IF3）结合以阻止30亚基与50S亚基重新结合；然后30S亚基与mRNA结合成 30S·mRNA·IF3复合物（组分比例1:1:1)。第二步是30S·mRNA·IF3与已经含有结合态GTP及甲