5.3 神经化学方法课件.pptVIP

3 神经化学方法发现药物在脑内作用位点的神经化学方法3.1 寻找含有递质的神经元、合成递质的酶3.2 寻找递质受体  3.1 合成特定神经化学物的神经元定位 免疫细胞化学 A 定位化学物本身： 递质为肽 (或蛋白质)适用。将脑组织切片暴露于与染剂藕联(通常是一种荧光燃料)的这种肽的抗体，然后在特殊波长的光线下观察。 B 定位合成它们的酶 如乙酰胆碱不是肽，不能使用免疫细胞化学法，通过免疫细胞化学法直接定位产生乙酰胆碱的酶。乙酰胆碱是由胆碱乙酰转移酶(ChAT)合成的，含有这种酶的神经元多数会分泌乙酰胆碱，将脑组织暴露于带有荧光染色的酶（ChAT）的抗体中。 3.2 特定受体定位 神经递质、神经调质和激素通过与受体结合向目标细胞传递信息。可以用两种不同的方法定位这些受体。 第一种是放射自显影技术 第二种是用免疫细胞化学技术 4 遗传学方法 所有的行为都取决于个体大脑与环境的相互作用。许多行为特征诸如才能、个性差异及精神疾病都具有家族性。这个事实提示遗传因素可能参与生理差异的形成并最终导致这些特征。在某些病例中，遗传的相关性是很明显的:基因缺陷干扰脑的发育，神经生理异常导致行为缺陷。另外一些例子中遗传和行为之间的联系则更加微妙，必需用遗传学方法来揭示。 （四）靶突变 靶突变是在实验室里制造突变基因，将它们插入小鼠的染色体中。突变基因是有缺陷的，不能产生功能性蛋白质。 靶突变使神经科学家们能够研究某种蛋白质 (例如一种酶、结构蛋白或受体等)的缺乏给动物的生理和行为特征带来的影响。 研究方法:第二部分 记录单个神经元的电活动 玻璃或金属微电极 金属微电极持久植入脑中，在动物活动时记录神经 记录脑区电活动 金属粗电极 人体上常用特定黏胶贴在头皮上 记录神经活动诱导的磁场 脑磁图描记法 可以确定同步放电的神经位置 使用神经磁力计，使用一组SQUID 记录脑区的代谢活性 2-DG放射自显影 测量局部葡萄糖利用率 Fos蛋白的测量 鉴定最近激活的神经元 2-DG PET扫描， fMRI 测定人脑区域代谢活性 测定神经递质和神经调质 微透析 可以分析多种物质 测定活体人脑中的神经化学物 PET扫描 可以定位人脑中的任何放射性物质 神经活动的诱发 电刺激 激活电极尖端的神经元和路经该区的轴突 兴奋性氨基酸导致化学刺激 仅激活导管尖端周围的神经元，不影响路经此地的轴突 跨脑磁刺激 用放置在头部的电磁刺激人大脑皮层的神经元 研究方法:第三部分 目的 方法 备注 鉴定合成特定神经递质或 免疫细胞化学定位肽或蛋白质 需要特异性抗体 神经调质的神经元 免疫细胞化学定位负责物质合成的酶 　　该物质不是蛋白质或肽类时使用 鉴定含有特定受体的神经元 放射性配体的放射自显影定位 免疫细胞化学定位受体 　 需要特异性抗体 * 脑片浸泡于针对特定受体的放射活性配体的溶液 漂洗脑片 脑片上保留的放射性与受体结合的配体分子 放射自显影来定位放射性配体以及与它结合的受体 脑片浸泡于荧光染料标记的特定抗体 漂洗脑片 特定波长的光镜下观察荧光标记的脑片 将少量性激素注入卵巢切除后的雌鼠的VMH中 大鼠恢复性行为 与受体结合的放射性配体分子在脑