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第6章 细胞培养 本章教学目的与要求 1、掌握得到单细胞无性系的技术 2、掌握细胞培养的方法，其含义及特点 3、学会小细胞团的计数方法 4、了解影响单细胞培养的因子 5、掌握细胞悬浮培养的方法：成批培养；连续培养。 6、理解细胞悬浮培养的应用 制备单细胞: 单细胞培养常用的方法： （一）、看护培养法（Nurse culture） 用途：诱导形成单细胞系。 2 看护培养基本技术 （1）在一个培养瓶中加入一定量厚的固体培养基，灭菌后备用。 （2）在无菌条件下，将一小块（1cm3）活跃生长的愈伤组织接种到培养基上，再在愈伤组织块上放一片（1cm2）已灭菌的滤纸，放置一晚上。 （3）将分离的单细胞接种到培养基的滤纸上。 （4）恒温培养。 优点：（1）简便易行。（2）效果好，易于成功。缺点：（1）不能在显微镜下直接观察细胞的生长过程。 1 微室培养的含义及用途 用途:主要用来观察细胞生长、分裂、形成细胞团的过程。 （三）、平板培养法（Plante Culture） 1 含义及用途： 1、成批培养特点 2、成批培养的方法 (1)旋转培养 (2)往返震荡培养 (3)旋转震荡培养 (4)搅动培养 1、连续培养的特点： (1)半连续培养：每隔一定时间倒出一定量的悬浮液，同时补充加入等量的新鲜培养液 (2)连续培养： 封闭式和开放式 三、细胞悬浮培养主要应用 1、 植物有用物质的生产 2、诱发和筛选突变体 3、原生质体培养和细胞分离 4、食品生产。 本章小结： 1、单细胞的分离方法:1)愈伤组织诱导;2)单细胞悬浮液的制备 2、单细胞培养的方法:（1）、看护培养法;(2)微室培养法;(3)平板培养法 3、平板培养的基本技术 （1）单细胞悬浮液的制备 (2)悬浮细胞密度的调制 （3）琼脂培养基配制:0.7 % 琼脂条件培养基。 （4）平板制作 （5) 培养 本章小结： 4、影响单细胞培养的因子:1)条件培养基;2)初始细胞植板密度(临界密度);3)生长物质;4)pH;5)CO2 5、细胞悬浮培养方法：成批培养；连续培养。 6、成批培养的方法。 7、连续培养的种类：(1)半连续培养；(2)连续培养。 8、连续培养的方法:（1）浊度恒定法;（2）化学恒定法 9、细胞悬浮培养的应用：（1）植物有用物质的生产；（2）诱发和筛选突变体；（3）用于原生质体培养和细胞器分离；（4）食品生产 （二）、连续培养（Continuous culture） 含义：指在培养过程中，以不断抽取悬浮培养物并注入等量新鲜培养基，使培养物不断得到养分补充，保持其恒定体积的培养。 第二节 细胞悬浮培养 （1）新鲜培养基的不断加入,保证了养分的充分供应；（2）可使细胞保持在增殖旺盛的对数生长期中；（3）适于大规模工业化生产 第二节 细胞悬浮培养 第二节 细胞悬浮培养 2、连续培养的种类： Production of anthocyanin 加入培养基 排出培养基及其培养物 第二节 细胞悬浮培养 连续培养图示： 第二节 细胞悬浮培养 第6章 细胞培养 第6章 细胞培养 * * 大 家 好 ！ 植物组织培养学 本章主要内容 第6章 细胞培养 单细胞培养 细胞悬浮培养 第6章 细胞培养 Haberlandt： 观点： 首次进行离体细胞培养 高等植物的组织和器官可以分割成单个细胞 小野芝麻和凤眼兰的栅栏细胞和虎眼万年青属表皮细胞 第6章 细胞培养 第一节 单细胞培养 一、单细胞的分离 分离的单细胞 看护培养 微室培养 平板培养 单细胞无性系 第6章 细胞培养 愈伤组织或悬浮培养物(常); 用纤维素酶和果胶酸酶从组织分离 由组织器官经愈伤组织分离单细胞 步骤： 1） 诱导产生愈伤组织； 2） 愈伤组织反复继代，使组织不断增殖，提高愈伤组织松散性； 第一节 单细胞培养 茎段 悬浮振荡培养 3）将愈伤组织在液体培养基中培养，建立悬浮培养物 优点：细胞团成小细胞团或单细胞；在培养基中均匀分布；有空气交流。 第一节 单细胞培养 二、单细胞培养方法（Single cell culture） 第一节 单细胞培养 第一节 单细胞培养 单细胞培养方法 看护培养法 微室培养法 固体平板培养法 液体浅层培养法 第一节 单细胞培养 含义：指用一块活跃生长的愈伤组织来看护单个细胞，并使其生长和增殖的方法。 1 看护培养的含义及用途 看护培养图示： Nurse callus Filter paper Single cell 单细胞无性系 恒温培养1个月 2~3月 用一块活跃生长的愈伤组织来看护单个细胞，并使 其生长和增殖。这个愈伤组织块称为看护愈伤组织 第一节 单细胞培养 第一节