蛋白酶发酵养基.doc

碱性蛋白酶发酵菌种为芽孢杆菌(Bacillus)，?37℃，培养48?h， 1发酵培养基l：可溶性淀粉1%、蛋白胨0.5%、Na2HPO4*12H2O?0.4%?、KH2PO4?0.03%?、CaCl2?0.1%?、pH中性、121℃灭菌25?。 2发酵培养基Il：玉米粉2%?、豆饼粉3%?、麸皮3%?、Na2HPO4*12H2O?0.4%?、KH2PO4?0.03%?、ZnCl2?0.1%?、pH?8.0、121℃灭菌25?min。 发酵培养基(1000mL)：黄豆饼粉50g，玉米粉50g，麸皮25g，KH2PO4?0.3g，Na2HPO4?0.4?g，Na2CO3?lg；?自然pH，在36℃下通风培养，前期通风1：0.15，后期通风1：0.2，搅拌40?h左右。 低温碱性蛋白酶：黄海黄杆菌 发酵培养基 (1)?豆饼粉(水解液，加0.5%NaOH，121℃水解30min，冷却、过滤)4.5%、玉米浆(酶解液.购自华北制药厂)6%、Na2HPO4?0.4%、KH2PO4?0.03%、Na2CO，0.1%、MgSO4?0.02%、CaC12?0，2%、泡敌约0.5‰(视具体情况及时补加)，pH?7，121℃灭菌30?min。 (2)豆饼粉(水解液.加0.5?NaOH，121℃水解30?min，冷却、过滤)4.5%、葡萄糖1%、Na2HPO40.4%、KH2PO40.03%、Na2CO3?0.1%、MgSO4?0.02%、CaC12??0.2%、泡敌约0.5‰(视具体情况及时补加)，pH7。?121℃灭菌30min 分批发酵动力学试验 使用瑞士Bioengineering公司NLF22型自动控制发酵罐进行分批发酵。发酵罐容积20?L?.两层六平直叶搅拌，双挡板。采用1.2.3节(1)培养基，装料系数0.65，接种量4%，培养温度18℃?，以5mol/L?NaOH液调节pH7左右，通气量1：1、搅拌速度300～500r/min，控制溶氧在35%～45%之间。 补料分批发酵试验 使用瑞士?Bioengineeri?g公司NLF22型自动控制发酵罐进行补料分批发酵。发酵罐容积2OL，两层六平直叶搅拌，双挡板。采用1.2.3节(2)培养基，装料系数0.4，接种量4%，培养温度18℃，以5mol/L?NaOH液调节pH?7左右，通气量1：1、搅拌速度300～500?r/min，控制溶氧在35?～45?之间。当细胞进入对数生长期后以60%葡萄糖补料，控制底物浓度并及时取样测定糖浓度、细胞浓度及总酶活力。 弹性蛋白酶发酵培养基 酪蛋白胨3%，葡萄糖4%，玉米提取液0.2%，K2HPO4?0.1%，MgSO4*7H2O?0.01%，pH7.0.发酵菌种为芽孢杆菌，发酵培养24h. 对黑曲霉黄色变株A一2580产耐温酸性蛋白酶的发酵条件进行优化，由试验结果得如下结论： (1)?麸皮和豆饼粉分别是该菌发酵产生酸性蛋白酶的良好碳源和氮源. (2)通过正交试验优化培养基，确定其最适产酶培养基为(g/L)：麸皮21.6、豆饼粉?48.4、NH?C1?2.0、KH2PO?0.8. (3)培养基起始pH为4～5，接种量30?ml发酵液中2×10??8次方个孢子，发酵温度30℃，时间72?h，酸性蛋白酶的产量达到最高，平均酶活达6700?u/m1. 中性蛋白酶： 菌种耐热芽孢杆菌XJT9503，从新疆吐鲁番火焰山土壤里分离筛选而得. 种子培养基组分(g/dI?)：玉米粉2，豆饼粉1，磷酸氢二钠0.4，硫酸镁0.02，氯化钙0.02. 发酵培养基组分(g/dI?)：玉米粉2，豆饼粉1，葡萄糖0.5，磷酸氢二钠0.4，碳酸钠0.085，硫酸镁0.02，氯化钙0.02. 3?000?L发酵罐发酵工艺参数为：将培养8?h的种子罐种子，以5%接种量移种于3?000?L发酵罐，46℃?、180?r/min、4?L/(L·min)通气量下发酵培养18?h左右，测定发酵酶活达10?000?u/mI?以上，还原糖含量低于0.5%，镜检有大量芽孢产生时即可终止发酵，为保证后处理过程中酶活不会大量损失，需迅速降温. 普通中温淀粉酶菌种a一淀粉酶 枯草芽孢杆菌BF-7658变异株具有较高的产活力，其最适pH为7.5，最适碳氮比为1.4：1。a-淀粉酶发酵培养基：玉米粉7%，豆饼粉5%，磷酸氢二钠0.8%，硫酸铵0.4%，氯化钠0.15%，灭菌前pH7.0一7.5，灭菌后pH6.5—7.0。37.4±1℃下培养44～48小时。 （1）初筛培养基：干酪素2.0%（用2.0% NaOH 溶液加热溶解），琼脂1.5%，pH 7.0；（2）斜面培养基：牛肉膏0.4%，蛋白胨0.6%，酵母浸出粉0.2%，NaCl 0.5%，琼脂2.0%，pH 7.0；（3）发酵培养基Ⅰ：麸