蛋白质定量及脂蛋白电泳学生用探究.pptVIP

实验报告要求 题目，组号 实验目的 实验原理 实验操作：如实记录 实验结果及结果分析：实事求是 讨论或小结：认真分析，仔细思考 实验三 测定蛋白质的比色分析法 实验目的 1. 掌握双缩脲法测定蛋白浓度的原理; 2. 掌握Lowry氏法测定蛋白浓度的原理; 3. 学会使用分光光度计; 4. 了解蛋白质定量的基本方法。 操作一 Lowry氏法测定蛋白质含量 实验原理 操作步骤 计算方法 试剂及器材 Folin-酚试剂法（Lowry法）原理 在碱性条件下蛋白质的肽键与Cu2+螯合，形成蛋白质-铜复合物。（双缩脲反应） 蛋白质分子中带有酚基的酪氨酸极易使酚试剂中的磷钼酸-磷钨酸还原，生成蓝色化合物，蓝色深浅与蛋白质含量成正比。（还原反应） 利用蓝色深浅与蛋白质浓度成正比的关系可绘制标准曲线，测定样品中蛋白质含量。 Folin-酚试剂法优缺点 优点:灵敏度高。 灵敏度比双缩脲法高100 倍，定量范围为25～250μg蛋白质 缺点:干扰物质较多。 1)对双缩脲反应发生干扰的离子; 2)Folin 试剂显色反应由酪氨酸、色氨酸和半胱氨酸 引起，因此样品中若含有酚类、柠檬酸和巯基化合物 均有干扰作用。 3)此外，不同蛋白质因酪氨酸、色氨酸含量不同而使 显色强度稍有不同。 Folin-酚试剂法测定蛋白质含量为什么比双缩脲法灵敏?