第四章核酸操作的基本技术..pptVIP

第四章 核酸操作的基本技术 新疆农业大学农学院 第四章 核酸操作的基本技术 核酸的操作技术是基因工程最基本的技术之一 在基因工程技术中，研究的对象和材料都涉及到核酸 核酸技术包括：核酸的提取与纯化、检测与保存、凝胶电泳、分子杂交等 第一节 核酸的提取与纯化 制备核酸的根本要求：保持核酸的完整性，既保持天然状态 细胞内核酸酶活力很高，防止核酸酶对核酸的降解 防止化学因素（酸、碱等）和物理因素（高温、机械剪切等） RNase分布广，活力很高（RNA) DNA分子长、容易断裂，防止张力剪切作用 第一节 核酸的提取与纯化 提取纯化核酸分为三大步 细胞破碎 除去与核酸结合的蛋白质及多糖脂等杂质 除去其他杂质核酸 一、基本原理 （一）化学试剂提取法 CTAB法 SDS法 （二）离心分离法 （一）化学试剂提取法 CTAB法 CTAB(十六烷基三乙基溴化铵)是一种去污剂，可溶解细胞膜，它能与核酸形成复合物，在高盐溶液中（0.7 mol/L NaCl）是可溶的，当降低溶液盐浓度到一定程度（0.3 mol/L NaCl）时，从溶液中沉淀，通过离心就可将CTAB-核酸的复合物与蛋白，多糖类物质分开。最后通过乙醇或异丙醇沉淀DNA，而CTAB溶于乙醇或异丙醇而除去。 （一）化学试剂提取法 SDS法 研磨的组织细胞用热的SDS裂解后，加入高浓度的KAc，0℃放置以除去蛋白和多糖类杂质，最后用乙醇或