体外培养人羊膜上皮细胞的表型及分化能力.docVIP

体外培养人羊膜上皮细胞的表型及分化能力 连建春1，刘 洋2，刘 畅2, 3，吕世杰4，郭 昕2，南 丰5，孙广炜2，贺 欣1，马小军2 (1大连医科大学检验医学院，辽宁省大连市 116044；2中国科学院大连化学物理研究所生物医用材料工程组，辽宁省大连市 116023；3中国科学院大学，北京市 100049；4大连市妇产医院，辽宁省大连市 116021；5大连医科大学附属第二医院骨科，辽宁省大连市 116023) 文章亮点： 1 实验分析了体外培养对羊膜上皮细胞表型以及分化能力的影响，探讨原代羊膜上皮细胞干性标志物SSEA-4的表达水平与体外培养后羊膜上皮细胞表型以及分化能力变化的关联性。 2 结果提示需要建立临床样本筛选指标以实现羊膜上皮细胞的质量监控；需要继续优化培养条件以维持体外培养过程中SSEA-4等干性标志物的高表达；羊膜上皮细胞的向心肌样细胞分化的能力受到个体差异与培养条件的影响，还需要进一步探讨。 关键词： 组织构建；组织工程；羊膜上皮细胞；体外培养；SSEA-4；羊膜上皮细胞标志物；心肌样细胞分化；国家自然科学基金 主题词： 干细胞；羊膜；上皮细胞；细胞分化；肌细胞, 心脏；抗原, 表面 基金资助： 国家自然科学基金：模拟细胞微环境强化干细胞体外定向预分化体系的研究及其工程化构建；国家自然科学基金：利于肿瘤干细胞扩增的基质刚度与乏氧微环境的构建及调控。国家自然科学基金：细胞间质体外模拟系统的构建及物质传递基本规律的研究。国家科技重大专项(2012ZX10002-011-013)：肝癌细胞三维培养模型标准化构建和规模化制备技术研究；大连市科学技术基金(2012J21DW029)：体外肿瘤干细胞培养体系的建立及应用 摘要 背景：人羊膜上皮细胞具有多系分化能力，是再生医学中重要的细胞来源。目前的研究多集中于对其分化能力的考察，而体外培养过程中羊膜上皮细胞的生物学特征如何变化尚不清楚。 目的：分析体外培养对人羊膜上皮细胞生长、表型及向心肌样细胞分化的能力等生物学特性的影响，探讨原代人羊膜上皮细胞干性标志物SSEA-4的表达水平与人羊膜上皮细胞生物学特性变化之间的关联性。 方法：使用统一分离方法获得原代羊膜上皮细胞并进行体外培养。利用CCK-8、流式细胞仪及real-time PCR等手段检测不同培养阶段人羊膜上皮细胞的增殖、表型以及向心肌样细胞分化的能力。 结果与结论：不同胎儿样本来源的原代人羊膜上皮细胞的SSEA-4表达在26.7%-97%，存在很大的个体差异。并且，随着传代次数的增加，人羊膜上皮细胞的SSEA-4表达水平显著降低，其下降程度与原代SSEA-4的表达水平无关。另外，培养后人羊膜上皮细胞的心肌分化潜能也存在很大个体差异，且其差异与原代人羊膜上皮细胞的SSEA-4表达水平的高低无关。结果提示，不同胎儿样本来源的原代人羊膜上皮细胞的SSEA-4表达水平受到个体差异的影响，需要建立更准确的临床样本筛选指标来稳定获得原代高表达SSEA-4的胎儿样本，以实现对人羊膜上皮细胞的质量监控。另外，体外培养过程中SSEA-4的表达水平受到培养条件的影响，需要继续优化培养条件以维持其高表达。此外，人羊膜上皮细胞向心肌样细胞分化的能力受到样本个体差异以及培养条件的影响，在今后还需要进一步研究。 连建春，刘洋，刘畅，吕世杰，郭昕，南丰，孙广炜，贺欣，马小军. 体外培养人羊膜上皮细胞的表型及分化能力[J].中国组织工程研究，2014，18(2):211-217. Phenotype and differentiation capacity of human amniotic epithelial cells cultured in vitro Lian Jian-chun1, Liu Yang2, Liu Chang2, 3, Lv Shi-jie4, Guo Xin2, Nan Feng5, Sun Guang-wei2, He Xin1, Ma Xiao-jun2 (1The Laboratory Medical College, Dalian Medical University, Dalian 116044, Liaoning Province, China; 2Laboratory of Biomedical Material Engineering, Dalian Institute of Chemical Physics, Chinese Academy of Sciences, Dalian 116023, Liaoning Province, China; 3University of Chin