14―脱羟―11，12―二脱氢穿心莲内酯对糖尿病大鼠血糖及肿瘤坏死因子―α的影响.docVIP

14―脱羟―11，12―二脱氢穿心莲内酯对糖尿病大鼠血糖及肿瘤坏死因子―α的影响 　　[摘要] 目的 观察14-脱羟-11，12-二脱氢穿心莲内酯对链脲佐菌素（streptozotocin，STZ）所致的糖尿病（diabetes mellitus，DM）大鼠血糖及肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的影响。 方法 采用腹腔注射STZ建立DM模型，将成模大鼠随机分为模型组、低剂量组、高剂量组，并设正常对照组。给药14 d后，断尾采血测血糖，苏木精和伊红（HE）染色观察胰岛的形态，免疫组织化学检测TNF-α的表达。 结果 与正常组比较，模型组血糖明显升高（P 0.05），胰腺组织病理损害严重，TNF-α表达呈强阳性；与模型组比较，低、高剂量组血糖均下降（P 0.05），胰腺组织病理损害减轻，TNF-α表达下调。 结论 糖尿病时胰岛β细胞中的TNF-α表达增高，14-脱羟-11，12-二脱氢穿心莲内酯可降低血糖，下调TNF-α的表达，减轻胰腺的病理损伤，改善胰岛功能。 　　[关键词] 穿心莲内酯；糖尿病；肿瘤坏死因子-α；胰岛β细胞 　　[中图分类号] R286 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2013）03（a）-0017-03 　　糖尿病（diabetes mellitus，DM）是一种以慢性高血糖为特征的代谢紊乱性疾病，其发生发展有多种病理生理过程的参与，其中，炎症反应正引起人们的广泛关注。穿心莲属爵床科植物，其化学成分主要为内酯类和黄酮类，有清热解毒、凉血消肿等功效。内酯化合物主要含于穿心莲叶中，主要成分有：穿心莲内酯（andrographolide）、新穿心莲内酯（neoandrographolide）、去氧穿心莲内酯（deoxyandrographolide）、脱水穿心莲内酯（dehydroandrographolide）[1]。穿心莲具有解热抗炎、抗病毒、保肝利胆、抗肿瘤、免疫调节、抗生育、降血糖、防治心血管病等药理作用[2]。14-脱羟-11，12-二脱氢穿心莲内酯是穿心莲内酯的一种成分，属于脱水穿心莲内酯。有研究表明，穿心莲水煮液有降血糖的作用[3]。为进一步了解穿心莲的降血糖的有效成分及可能机制，本研究通过链脲佐菌素（streptozotocin，STZ）建立糖尿病大鼠模型，观察14-脱羟-11，12-二脱氢穿心莲内酯对糖尿病大鼠血糖、胰岛组织形态、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）表达的影响，以探讨14-脱羟-11，12-二脱氢穿心莲内酯抗炎作用与降血糖和胰岛保护的关系。 　　1 材料与方法 　　1.1 动物 　　健康雄性SD大鼠52只，体重（220±20）g，清洁级，购自山西医科大学实验动物中心。 　　1.2 试剂药品与仪器 　　链脲佐菌素，购自美国Sigma公司；14-脱羟-11，12-二脱氢穿心莲内酯-3，19- 二琥珀酸半酯钾钠盐，购于哈医集团三精加滨药业有限公司（批号：201102081）；TNF-α一抗，购于武汉博士德生物工程有限公司（编号BA0131）；SV-0002两步法免疫组化检测试剂盒，购于武汉博士德生物工程有限公司；二氨基联苯胺（DAB）显色试剂盒，购于武汉博士德生物工程有限公司（编号：AR1022）；三诺安稳血糖仪和试纸条，购自长沙三诺生物传感技术股份有限公司。 　　1.3 方法 　　1.3.1 糖尿病大鼠模型的制备 将52只健康雄性SD大鼠，适应性喂养1周。禁食12 h测空腹血糖，选择空腹血糖正常的大鼠50只，将其中10只作为正常对照组，其余40只大鼠均一次性腹腔注射1% STZ 55 mg/kg（pH=4.5，0.1 mol/L柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液，现配现用），5 d后断尾取血测空腹血糖。血糖值16.7 mmol/L者为DM模型成立[4]。正常组给予1～2 mL柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液。 　　1.3.2 分组与用药 选取成模大鼠36只，随机分为模型组、高剂量组、低剂量组，每组12只。成模后第2天，低剂量组给予14-脱羟-11，12-二脱氢穿心莲内酯100 mg/（kg?d），高剂量组给予14-脱羟-11，12-二脱氢穿心莲内酯200 mg/（kg?d），正常组和模型组给予等体积的生理盐水，每天5～6 mL腹腔注射，连续给药14 d。于给药结束后禁食12 h，断尾取血测血糖，麻醉后取胰腺，用4%多聚甲醛固定24 h后制成蜡块标本，用于做免疫组化、苏木精和伊红（HE）染色。 　　1.4 检测指标 　　1.4.1 血糖测定 断尾采血，采用血糖仪测血糖。 　　1.4.2 胰腺组织HE染色 将胰腺组织的蜡块标本切成4 μm厚的切片，切片常规脱蜡至水，苏木精染细胞核，伊红染细胞质，梯度酒精脱水，二甲苯透明后中性树胶封片。镜下观察胰岛形态。