Wnt―1蛋白在宫颈鳞癌及癌前病变中的表达及意义.docVIP

Wnt―1蛋白在宫颈鳞癌及癌前病变中的表达及意义 　　[摘要] 目的 探讨Wnt-1蛋白在子宫肌瘤组织，宫颈病变组织（上皮内瘤变和宫颈鳞癌）中的表达及意义。 方法 取同期因子宫肌瘤行子宫全切的患者30例，宫颈上皮内瘤变患者（CIN）63例，宫颈鳞癌患者51例，术前均未接受放化疗，或其他治疗。用免疫组化SABC法对Wnt-1蛋白在正常宫颈组织、宫颈上皮内瘤变（CIN）组织和宫颈鳞癌组织中的表达水平进行检测。 结果 宫颈病变组Wnt-1表达明显高于子宫肌瘤组，差异有统计学意义（P 0.001）；Wnt-1表达高度病变组高于低度病变组，差异有统计学意义（P = 0.048），宫颈鳞癌组高于低度病变组，差异有统计学意义（P 0.001）；宫颈鳞癌组高于高度病变组（P = 0.039）。 结论 Wnt信号通路的主要成员Wnt-1蛋白的过高表达与宫颈病变的发生、发展有关。 　　[关键词] 宫颈上皮内瘤变；宫颈癌；Wnt经典信号通路；Wnt-1蛋白；免疫组化法 　　[中图分类号] R737.3 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2013）04（b）-0042-02 　　宫颈癌是危害女性生命健康的恶性肿瘤之一，在导致妇女死亡的恶性肿瘤中居排第2位，仅位于乳腺癌之后[1]。近几年来，全世界宫颈癌的发病率呈现明显上升及低龄化趋势。Wnt蛋白在Wnt信号通路中起到重要作用，通过与细胞膜上的受体结合，从而使胞内信号传导分子活化，进而调节靶基因的表达，参与经典Wnt信号通路的蛋白质主要有Wntl、Wnt3a和Wnt8。采用免疫组化SABC法，检测Wnt-1蛋白在宫颈病变组（宫颈上皮内瘤变、宫颈鳞癌组织）和正常宫颈组织（子宫肌瘤）中的表达，进而探讨Wnt蛋白在宫颈病变进展中的作用。 　　1 材料与方法 　　1.1 标本来源 　　取2011年8月～2012年10月山西省肿瘤医院病理科妇科手术切除的子宫颈鳞癌组织蜡块51例、宫颈上皮内瘤变组织63例（低度病变组28例，高度病变组35例），随机选取正常子宫颈组织蜡块（同期因子宫肌瘤而非子宫颈病变行子宫全切术）30例作为对照，年龄为25～72岁，平均（36.5±7.5）岁。所有患者均未经放化疗，术后均经病理证实。各组一般情况差异无统计学意义。 　　1.2 主要试剂 　　兔抗人Wnt-1多克隆抗体购为北京博奥森生物技术有限公司产品，二抗鼠抗兔即用型SABC试剂盒为武汉博士德生物工程有限公司产品。 　　1.3 实验方法 　　切片常规脱蜡，水化，PBS洗两次各5分钟，配置3%H2O2，抗原修复，PBS洗5 min。滴加正常山羊血清封闭液，甩去多余液体，滴加一抗（Wnt-11∶150）4℃过夜，37℃复温，PBS洗3次，每次2 min，滴加生物素化二抗，PBS洗2 min×3次，滴加试剂SABC，PBS洗5 min×4次，DAB显色，苏木素复染，盐酸酒精分化，脱水、透明，封片，PBS代替一抗做阴性对照。 　　1.4 阳性结果判定 　　经免疫组化分析，Wnt-1蛋白主要定位于细胞质，阳性染色以细胞质出现棕黄色颗粒为标准。分级标准，阳性细胞数≤2%：0分；2%～20%：1分；21%～50%：2分；≥50%：3分。着色程度，无着色：0分；淡黄色：1分；棕黄色为2分。最后得分为阳性细胞数以及着色程度相加值，阴性（-）：≤1.9分；弱阳性（+）：2.0～2.9分；阳性（++）：3.0～3.9分；强阳性（+++）：≥4分。 　　1.5 统计学处理 　　数据统计采用SPSS 16.0软件包检验。Wnt-1蛋白表达数据为等级资料，差异比较采用秩和检验，P 0.05为差异有统计学意义。 　　2 结果 　　各组Wnt-1表达差异有统计学意义（χ2=58.610，P 0.001）。进一步做两两比较：低度病变组、高度病变组、宫颈鳞状癌组Wnt-1表达明显高于正常组，差异均有统计学意义（P 0.001）；高度病变组高于低度病变组，差异有统计学意义（P = 0.048），宫颈癌组高于低度病变组，差异有统计学意义（P 0.001）；宫颈癌组高于高度病变组（P = 0.039）。见表1。 　　3 讨论 　　已有文献报道，经典的Wnt信号通路的激活与一系列肿瘤的发生、发展密切相关。Wnt信号通路是一个复杂的蛋白质网络，正常情况下对胚胎发育和成人部分组织的形成及功能起着重要作用，例如在细胞的增殖、分化和迁移起到一定的调节作用。目前已知的主要有19种Wnt蛋白，其中激活经典通路的有Wnt1， Wnt3a和Wnt8。Wnt1该基因编码370个氨基酸序列，它的异常表达与人类某些系统肿瘤的发生发展密切相关。本研究发现，Wnt-1蛋白在子宫肌瘤组织中的表达水平明显低于其在高度病变组织和宫颈