人外周血树突状细胞的诱导、培养及其表面标记的鉴定.docVIP

人外周血树突状细胞的诱导、培养及其表面标记的鉴定 【关键词】 树突状细胞 【关键词】　树突状细胞；外周血；共刺激分子 　0引言 树突状细胞的特点及功能是目前肿瘤免疫研究的热点，本研究将在DC的培养及其表面标记等方面做进一步的探讨, 为DC的进一步研究奠定基础. 　1材料和方法 1．1材料 重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子，重组人白细胞介素4 ，肿瘤坏死因子α 均购自深圳晶美公司, FITC标记的单抗：CD83，CD40，HLADR，CD86购自深圳晶美公司. 淋巴细胞分离液 ,小牛血清. 仪器： 美国B2D公司FACS Calibur流式细胞仪,Nikon荧光显微镜. 　　1．2方法 室温下将25 mL的富含白细胞的血液成分与等量淋巴细胞分离液混合，使用FicollHypaqu密度梯度离心法，室温3000 r/min，离心20 min后收集单个核细胞. 调节细胞浓度为106/mL,然后在6孔板上贴壁,每孔加2 mL, 3 h后吸去悬浮细胞,并用37℃预温新鲜培养液轻轻洗去未贴壁的细胞，加入Ⅰ号营养液:100 mL/L小牛血清RPMI 1640中含GMCSF 50 ng/ mL, IL4 10 ng/mL,在37℃