帕金森病大鼠模型纹状体内γ―氨基丁酸 A受体β亚基含量的变化.docVIP

帕金森病大鼠模型纹状体内γ―氨基丁酸 A受体β亚基含量的变化 　　【摘 要】目的：探讨在帕金森病（Parkinson’s disease，PD）状态下纹状体γ-氨基丁酸（gamma amino-butyric acid， GABA） A受体各个β亚基表达水平的变化。方法：分离6-羟基多巴（6-OHDA）制作成功的PD动物模型和正常SD大鼠的纹状体，应用高效液相（High Performance Liquid，HPLC）法测定纹状体中GABA的含量，应用qRT-PCR的方法检测纹状体中GABA A受体中β1亚基、β2亚基和β3亚基的mRNA的表达水平，应用western blot的方法检测纹状体中GABA A受体中β1亚基、β2亚基和β3亚基的蛋白质表达水平。结果：根据皮下注射阿扑吗啡判定成模的PD大鼠，纹状体内的GABA含量与对照侧及正常对照的双侧相比均下降不是很明显（P0.05），但在mRNA的表达水平上，纹状体中各个β亚基表达水平均有所升高（P0.05）；各个亚基的蛋白水平的变化趋势与mRNA的变化相致。结论：1. GABAA受体的β1亚基、β2亚基和β3亚基在检测纹状体中均有表达，存在受体共存现象。2. 与GABA在PD动物脑组织中含量相适应，在PD状态下，β1亚基、β2亚基和β3亚基有受体上调情况。 　　【关键词】帕金森病；gama-氨基丁酸；受体；β 亚基 　　【中图分类号】R742 【文献标识码】A 【文章编号】1004-7484（2013）10―0003―02 　　γ-氨基丁酸（ gamma- aminobutyric acid， GABA）是一种天然存在的非蛋白质氨基酸，研究表明在基底节环路中，GABA能神经元广泛分布于纹状体、苍白球内、外侧部（internal and external parts of glubus pallidus，GPi and GPe），GABA的受体则分布于苍白球外侧部（GPe）、丘脑底核（STN）、苍白球内侧部（GPi）、黑质网状部（SNr）和丘脑的腹前核/腹外侧核（VA/VL）。GABA受体包括GABA A、GABA B和GABA C有三个亚型，其中GABAA受体主要分布于脑内，GABA B受体则分布于脊髓和全身各处。GABA C受体主要分布于周围神经系统[1-2]。GABAA受体亚单位的β亚基具有GABA的结合位点，当GABA与突触后膜的GABA A 受体的β亚基结合后，使整个受体产生变构作用，打开氯离子通道，达到抑制突触后神经元的作用[3-4]。由于在PD状态下，基底节环路中的GABA含量在某些核团是升高的，而在其它核团是降低的。研究表明，配体浓度的升高或降低，有时会影响到突触后膜上受体含量的变化。那么，在PD状态下，在基底节环路的核团中，GABA A受体的β亚基的含量是否会随着GABA含量的变化而发生适应性的变化呢？还没有明确的报道。本研究应用qRT-PCR和western blot 的方法来检测GABA A受体的β亚基的分布范围及表达量是否存在变化，这种变化也可能会成为研究PD实验治疗的一个切入点。 　　1 材料和方法 　　1.1实验动物 40只SD大鼠 辽宁医学院动物中心提供 　　1.2 实验方法 　　1.2.1 PD动物模型的取材 　　选择连续检测8周后成模的PD模型大鼠和正常SD大鼠，6%水合氯醛深度麻醉后应用生理盐水灌注，转换脑组织中的血液，在冰上迅速分离脑组织，在解剖显微镜下分离出纹状体，称重备用。 　　1.2.2 高压液相色谱分析测定组织匀浆中GABA含量 　　取称重好的脑组织，按照1000?l/100mg的量加入匀浆液，充分研磨，4℃，14000rpm离心15分钟，小心吸出上清至另一新的高压灭菌后的1.5ml EP管中，再次离心收集上清，用0.45?m滤膜过滤后高压液相色谱分析法测定匀浆中GABA的含量。 　　1.2.3 纹状体中GABAA受体各个β亚基的表达 　　取称重好的纹状体，直接放入研钵中，加入少量液氮，迅速研磨，按照1ml/50mg组织的比例加入Trizol，提取总RNA和蛋白质，应用RT-PCR和western blot 方法检测GABAA受体β1，β2，β3亚基的mRNA和蛋白质的表达。 　　1.2.4 统计学处理 　　将实验所得数据以 ±s表示，利用SPSS13.0软件包行方差分析，P0.05有统计学意义 　　2 结果 　　2.1 PD动物模型的纹状体中GABA含量的检测 　　经过高效液相法测定GABA在纹状体中的表达水平，可见在纹状体中，损伤侧的GAGA含量降低，与其它三个部分相比具有统计学差异（P0.05）。 　　2.2 RT-PCR方法检测GABAA受体中各个β亚基的mRNA水平 　　取P