ch20Genetic Engineering本科白课件.ppt

第二十章 基因重组与基因工程 Genetic Engineering 1、学习目的与基本要求 （1）掌握基因工程的概念及其基本过程 （2）了解基因工程在医药领域中的应用 2、学习内容 （1）重组DNA技术相关概念：DNA克隆、限制性核酸内切酶、、cDNA、基因组DNA、聚合酶链反应；基因载体及类别；重组DNA技术中常用的工具酶：限制性核酸内切酶的种类及作用特点。 （2）基因工程基本原理；以质粒DNA为载体进行DNA克隆的基本过程。 （3）重组DNA技术与医学的关系。疾病基因的发现；发展新药物；DNA诊断；基因治疗；遗传病的防治。 （3）癌基因与抑癌基因：癌基因概念、抑癌基因概念、生长因子概念及类别。 3、考核知识和考核要求 （1）识记：克隆、重组DNA、限制性核酸内切酶，目的基因等概念；聚合酶链反应的原理及基本过程；载体的条件及特性；以质粒DNA为载体进行DNA克隆的基本过程。癌基因与抑癌基因的概念以及生长因子概念和类别。 （2）领会：基因工程在医药领域中的应用。 概述 1973年Cohn等人，首次获得体外重组DNA分子的无性繁殖系。 当代生命科学很多成就与进步归功于重组DNA技术的出现。 第一节 自然界的基因重组 基因重组(genetic recombination)是指某段DNA在细胞内或细胞间，甚至不同物种之间进行的交换，并能在新的位置上复制和表达的过程。 基因重组的方式组要有：转化、转导和转座等 一、转化 转化(transformation)：由外来DNA引起生物性状改变的过程称为转化。 二、转导 转导(transduction)：是指当病毒从被感染的细胞（供体）释放出来，再去感染另一细胞（受体）时，发生在供体细胞与受体细胞之间的DNA转移及重组过程，也称转导作用。 三、转座 大多数基因在基因组内的位置是固定的，但有些基因可以从一个位置移动到另一位置。这些可移动的DNA序列包括插入序列和转座子(transposons)。 转座(transposition)：由插入序列和转座子介导的基因移位或重排称为转座。 转座子转座 转座子(transposons)就是可从一个染色体位点转移至另一位点分散的重复序列，也就是一段可以发生转座的DNA。 McClintock B，1950年，玉米，1983年，诺贝尔生理学与医学奖。 含有抗生素抗性等有用的基因。 第二节 基因工程 Gregor Mendel，豌豆杂交实验，1865年 Oswald T Avery等，肺炎球菌转化实验，1944年 克隆、克隆化和克隆基因 转基因动物 重组DNA技术 1996年7月5日对罗斯林研究所伊恩·维尔穆特科学研究小组全体成员，是一个令人激动的日子；对全世界也是值得庆贺的一天。因为一只妊娠了148天，体重为6.6千克，编号为6LL3的小绵羊，来到这个世界，它是科学家们用克隆技术“复制”出来的。 经过几个月的精心呵护，这只身世不凡的小绵羊茁壮成长，并获得了一个动听的名字--多莉。这是维尔穆特用他喜爱的乡村歌手多莉·帕顿的名字命名的。 多莉出世历经曲折。科学家采用体细胞克隆技术，主要分四个步骤进行： 一、从一只6岁芬兰多塞特白面母绵羊(A)的乳腺中取出乳腺细胞，将其放入低浓度的营养培养液中，细胞逐渐停止分裂，此细胞称之为“供体细胞”； 二、从一只苏格兰黑面母绵羊(B)的卵巢中取出未受精的卵细胞并立即将细胞核除去，留下一个无核的卵细胞，此细胞称之为“受体细胞”； 三、利用电脉冲方法，使供体细胞和受体细胞融合，最后形成“融合细胞”。它像受精卵一样进行细胞分裂、分化，从而形成“胚胎细胞”； 四、将胚胎细胞转移到另一只苏格兰黑面母绵羊(C)的子宫内，胚胎细胞进一步分化和发育，最后形成小绵羊--多莉。 多莉有３个母亲。 一、工具酶 限制性核酸内切酶 连接酶 聚合酶 Klenow片段 反转录酶 多聚核苷酸激酶 末端转移酶 碱性磷酸酶 （一） 限制性核酸内切酶（restriction endonuclease） 定义：能识别DNA的特异序列，并在识别位点或其周围切割双链DNA的一类核酸内切酶。 限制性内切酶和甲基化酶共同构成细菌的限制和修饰系统。限制性内切酶由于能限制外源DNA的“入侵”而得名。 限制酶的命名 1、限制酶通常用三个斜体字母的缩写表示。 2、第一个大写字母取自细菌属名的第一个字母； 3、第二、三个小写字母取自微生物种名的头两个字母； 4、第四个字母代表该微生物同种内不同的株系；如果同一株名发现几种限制酶，则根据其被发现和分离的先后顺序，用罗马数字表示。 例如，从大肠杆菌(Escherichia Coli)RY13株中发现分离的第一种限制酶，称为EcoR I。 限制性内切酶的分类和特点 根据限制酶的组成、辅因子及切割DNA方式不同，可分为 I、I