金黄活血散对痛风大鼠软骨降解调控因子影响的实验研究.docVIP

金黄活血散对痛风大鼠软骨降解调控因子影响的实验研究 　　[摘要] 目的 通过金黄活血散对急性痛风性关节炎软骨降解细胞因子的调控，探索外用中药对尿酸盐结晶造成软骨损伤保护作用的机制和作用。 方法 按随机对照法将48只雄性SD大鼠随机分为4组：正常对照组、模型对照组、扶他林组（即阳性对照组）、金黄活血散组（即治疗组）共4组。造模成功后，各组于造模后第6天即踝关节局部给药物处理。连续给药1周后，取血清和软骨组织检测。 结果 MMP-3、TNF-α、IL-1含量测定：模型组与正常对照组比较，MMP-3、TNF-α、IL-1含量值明显升高（P 0.05），扶他林组与金黄活血散组与模型组比较，含量均低于模型组（P 0.05）。 结论 金黄活血散通过对软骨降解因子的影响，有助于恢复关节软骨降解与合成之间的平衡，达到对关节软骨的保护和治疗作用。 　　[关键词] 金黄活血散；痛风；软骨降解；实验研究 　　[中图分类号] R-33 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2013）04（b）-0015-03 　　痛风属于一种异质性的代谢类疾病，它的病理和临床表现为高尿酸血症、关节炎、泌尿系结石、痛风结节以及痛风性肾病。其中痛风结节属于痛风的特征性病变，是由于血中尿酸盐结晶析出、沉淀而造成的一种关节局部慢性异物样反应。一般情况下，血尿酸水平超过9.0 mg/dL（535 μmol/L）以上时，病史在2年以上的患者会有超过5%的概率出现痛风结节[1]。老年痛风患者因为代谢障碍，出现痛风结节的比率较高。研究显示[2]，具有长期痛风病史，并关节周围出现痛风结节的患者对骨关节的软骨和周围组织的损害比无痛风结节者要明显严重。这是因为痛风结节中含有较多的尿酸盐微结晶，这些结晶在病变关节周围引发非特异性炎症反应，多形核细胞对这些结晶吞噬后，迅速发生分解和脱颗粒，释放溶酶体酶，引发病变关节软骨的降解、骨质受到侵蚀性，进一步形成缺损、周围组织红肿、纤维化以及关节的继发性变性[3]。金黄活血散在临床应用中取得了显著的疗效，本实验目的在于通过实验模型软骨降解调控因子的影响，明确金黄活血散外敷中药保护痛风结节对软骨损伤的机制。 　　1 材料与方法 　　1.1 实验动物 　　健康雄性SD大鼠48只，体重180～220 g，由山西省中医院动物中心提供。适应性饲养1周后，称重，按体重大小标记，查阅随机数字表，分为4组，每组12只，即正常对照组、模型对照组、扶他林组（即阳性对照组）、金黄活血散组（即治疗组），定时定量给颗粒饲料，自由饮水。 　　1.2 主要试剂及药品 　　尿酸钠晶体为美国SIGMA-ALDRICH公司产品（214-838-1），购于上海国药集团化学试剂有限公司；IL-1、TNF-α试剂盒（北京北方生物技术研究所）；酶联免疫MMP-3试剂盒（北京东亚免疫所）。扶他林软膏（北京诺华制药有限公司）。 　　金黄活血散：姜黄160 g，大黄160 g，黄柏160 g，苍术64 g，厚朴64 g，陈皮64 g，甘草64 g，生天南星64 g，白芷160 g，天花粉320 g，乳香160 g，没药160 g，防已64 g，以上十三味，粉碎成细粉，过筛，混匀（山西省中医院制剂室提供），用时75%医用酒精调成糊状。 　　1.3 动物模型建立 　　通过对大鼠关节注射尿酸盐结晶造成局部关节的红肿、炎症及软骨的破坏，制成急性痛风性关节炎模型，在100 mL 0.9%氯化钠溶液中溶入2500 mg尿酸钠晶体颗粒，同时加温搅拌成浓度为25 mg/mL的尿酸钠溶液。除正常对照组外，其余各组均按参照Coderre等的经典方法造模[4]，在受试大鼠右后足踝关节背侧用6号注射针从45°方向插入胫骨肌腱内侧，针头抵骨膜，每只大鼠将0.2 mL尿酸钠溶液注入踝关节腔。每天注射1次，连续5 d，造模成功。 　　1.4 给药 　　造模第6天（即造模成功后第1天）对各组大鼠右后足踝关节局部予以下处理，连续给药1周：（1）模型组：模型组给予0.9%氯化钠溶液外敷2次/日。（2）扶他林组：给予扶他林软骨外敷2次/日。（3）金黄活血散组：给予金黄活血散外敷2次/日。（4）正常对照组：正常喂养，不给任何药物。 　　1.5 MMP-3，TNF-α，IL-1含量测定 　　给药1周后取大鼠血清及关节软组织标本。大鼠血清及关节软组织IL-1、TNF-α、MMP-3含量测定采用ELISA检测法。 　　1.6 统计学处理与方法 　　采用SPSS 17.0软件进行统计处理，计量资料用均数±标准差（x±s）表示，符合正态分布、方差齐性时，两组间比较采用独立样本均数的t检验，多组间比较采用单因素方差分析，若方差不齐采用秩和检验。以α=0.05为检验标准。 　　2 结果