天然药物活性筛选考卷.doc

2012级硕士研究生期末考题 请列举5种转基因动物可用于老年痴呆药物研究，并简要说明它们的特征和应用范围（5分）i APP转基因小鼠： 病理特征：APP水平是正常鼠的6倍， Ab增高10-14倍，出现淀粉样血管病变，脂质氧化损伤，超氧化物歧化酶增加 。9-10月龄小数空间辨识能力受损。 应用范围： APP 转基因鼠可用于抗老年痴呆中药的药效评价、活性筛选以及作用机制的研究。 ii APOE小鼠 特征：该模型的转基因小鼠动脉壁损伤严重,内皮细胞出现受损、变质、脱落,细胞内连接不紧密。内皮下间隙增宽,内弹力膜破坏和消失；中膜平滑肌结构破坏,合成型平滑肌较多。 应用范围：可用于模拟小鼠老化过程中动脉粥样硬化进程，以及药物等因素对动脉粥样硬化进程的影响。 iii 神经组织特异表达CTF1转基因小鼠 特征：转入的CTF1基因在脑组织的表达水平均高于同龄对照小鼠，CTF1转基因小鼠大小脑组织基本结构形态与正常小鼠对照没有异常。 应用范围：用于研究CTF1生物学功能与老年痴呆等疾病发病机制的关系。 iv 快速老化SAM-P小鼠 特征： 老化迅速，且其海马甲醛含量随老龄化进程而增加。 应用范围：研究内源性甲醛异常蓄积与记忆衰退关系，研究大鼠老化机制等。 PS1-GFP小鼠 特征：高表达早老蛋白PS1 应用范围：研究早老蛋白的结构和功能，了解其导致老年化的机制。 请比较细胞活性检测的几种方法的异同，包括MTT法、Hoechst 染色法、细胞排染实验、细胞克隆形成实验，包括实验目的、原理、方法、优缺点等（10分）①MTT法 实验目的：在肿瘤增值实验中，根据活细胞功能强弱，推测出活细胞MTT，生成蓝紫色不溶于水的甲臜（Formazan570nm 处进行测定。甲臜生成量与活细胞数成正比，因此可根据光密度OD活细胞的数目。 ② Hoechst 染色法③细胞排染实验④细胞克隆形成实验克隆测定则确切地反映了具有克隆能力的活存细胞数，并且适用于所有生长形式的细胞。请举例说明蛋白组学在心血管系统药物研究中的应用，标注参考文献。（5分）请说明时间分辨荧光（TRF） 和均相时间分辨荧光（HTRF）的技术原理和各自的优势。（5分）均相时间分辨荧光HTRF? 技术结合了荧光共振能量转移（FRET，Fluorescence Resonance Energy Transfer） 和时间分辨荧光（TRFTime Resolved Fluorescence)）两种技术。利用了具有穴状结构的Eu元素的螯和标记物和XL665作为一个供体（Donor），是基于Eu穴状化合物的供体与受体（第二荧光标记物）之间的荧光共振能量转移（FRET）。在荧光共振能量转移中，受体发射荧光的寿命等同与供体的发射荧光的寿命。结合了荧光共振能量转移（FRET，Fluorescence Resonance Energy Transfer） 和时间分辨荧光（TRFTime Resolved Fluorescence)）两种技术 试列举出十种常用的荧光探针，指出它们的应用范围和检测波长（5分）i芘 (Kex=335 nm,Kem=372,385 nm)，常用来测定极性溶液中蛋白质定量以及蛋白极性。 ii 4-氨甲基-7-烷氧基香豆素衍生物Photocaging荧光探针分子(Kex=390 nm,Kem=480 nm)用于快速、高通量检测细胞色素P450 2D6的分析。 iii罗丹明B荧光探针，最大吸收/发射在496/520 nm,极为适合于标记寡核甘酸,因为蛋白质会引起大多数罗丹明类荧光猝灭,故大多数不适宜用于标记蛋白。但近年以罗丹明类作为底物研究蛋白质、酶类引起了广泛关注。 iv溴化乙锭荧光探针，最大激发波长是232nm和最大发射波长615nm;用于色氮酸二肽(Trp.Trp)与小牛胸腺DNA的作用机制进行了研究。 v 8-苯胺基-1-萘磺酸(ANS)疏水探针。最大吸收/发射在375/500 nm,在一定范围内,荧光强度与蛋白质的浓度呈线性关系，可用于蛋白质浓度测定。 vi中性红(NR)分子探针，激发波长为467nm，发射波长为500—800nm范围内的荧光光谱，研究通过测定药物与DNA结合的规律，研究药物对DNA的作用机制。 2’,7’-二氯荧光素乙酰乙酸盐(2’,7’-di-chlorofluorescein diacetate, DCFH-DA)荧光探针法，激发波长 488 nm，发射波长 525 nm，用于检测细胞活性氧类(reactive oxygen species, ROS)水平。 vii荧光素衍生化试剂2ˊ,7ˊ-二(2-羧乙基)-5(6)-羧基荧光素(BCECF)探针，最大吸收/发射在492/525 nm，可用于研究细胞表面多药耐药基因MDR的表达产物：P-蛋白(P-gp)、多药