陈晓菲论文汇报.pptVIP

2 研究内容与方法 健康对照组：同期正常健康体检成人 22例,均选自2013年3月至2013年5月 在安徽省立医院体检中心体检的成人, 男15例,女7例。年龄44～80岁，平均 年龄(59.63±9.81)岁。 对照组入选及排除标准：实验前2周 内身体健康,无感染性疾病。均系无 心、肝、脑、肾和免疫、感染性疾病 及糖尿病的健康成年人,头部MRI检查 无颅内疾病。 （2）标本采集： 受试者均于清晨空腹状态下抽取肘静脉血2~3 ml,肝素抗 凝,标本在采集后2h内测定。 2 研究内容与方法 （3）标本处理 取2支FCM试管，分别标记为染色管和对照管，用微量移液器在各标记试 管中分别均加入100 ?l抗凝血，染色管中加入CD25-PE、CD4-FITC各10 μl及CD127-PE 2.5 μl，对照管加入CD4-PE和IgG1-FITC各10 μl，血液 和试剂确保加入管底,不要沾在试管壁上; 震荡器上充分混匀,使抗凝全血与 荧光标记的单克隆抗体充分接触,室温避光反应15 min； 加入溶血剂2 ml，充分震荡混匀,室温避光反应10 min，加入生理盐水2 ml，1 500 rpm离心5 min弃上清,取500 μl立即上流式细胞仪检测； 2 研究内容与方法 (4)流式细胞仪检测： 每次检测前常规用荧光微球和同型阴性对照试剂对仪器进行质量监测和调控, 并用标准方法对各荧光素之间的干扰进行补偿,排除相互干扰； 检测时先根据前向角和侧向角散射光信号,对淋巴细胞群进行设门,每次获取 设门内细胞20 000个以上并保存数据。用CellQuest Pro系统软件获取和分 析20 000 个细胞 2 研究内容与方法 (5)数据处理： 采用SPSS13.0软件进行统计分析,符合正态分布的数据以均数±标准差 (x±s)表示。两组样本间正态分布采用t检验进行分析,多组样本间采用 One Way ANOVO 的单因素方差分析进行检验,以P0.05为差异有统计 学意义。 2 研究内容与方法 研究结果 3 研究结果与意义 比较结果显示，与正常对照组相比，患者外周血CD4+CD25+CD127-Treg细胞CD4+T细胞比例在起病后24~48 h、3~7 d时显著降低，差异具有统计学意义(P0.01)；8~14 d则逐渐恢复至正常水平，与正常对照组无明显差异(P0.05); 图5 表明在急性脑梗塞后超早期，炎性免疫反应以促炎反应为主，促炎因子过度激活，效应T细胞过度活化，使Treg相对性减少，抑制了Treg活化分化，正是由于Treg免疫抑制能力的下降，这些发挥免疫保护作用的Treg细胞数量和功能的抑制加重了炎性反应所致的脑组织二次损伤。提示CD4+CD25+CD127lowT细胞对缺血性脑损伤具有保护作用，其功能下调导致了缺血性脑损伤进一步加重。 3 研究结果与意义 比较结果显示，与正常对照组相比，患者外周血CD4+CD25++Treg细胞占CD4+ T细胞比例在起病后24~48 h、3~7 d时显著降低，差异具有统计学意义(P0.01)；8~14 d则逐渐恢复至正常水平，与正常对照组无明显异(P0.05); 图 3 研究结果与意义 结果显示，与正常对照组相比，患者外周血CD4+ T细胞占淋巴细胞比例在起病后24~48 h、3~7 d、8~14 d时均高于正常对照组，差异具有统计学意义(P0.05)。 图 研究结果与意义 3 以上结果显示，与正常对照组相比，急性缺血性脑卒中患者的CD4+T细胞比例明显增高。可能由于卒中后损伤所导致的血脑屏障破坏，使得平时隐含的特殊的CNS抗原暴露于免疫系统并得以进入体循环，从而可能造成自身免疫性损伤。与此同时，急性缺血性脑卒中患者外周血CD4+CD25+CD127lowT细胞和CD4+CD25highT细胞比例在发病24h?48 h及3?7 d较正常对照组下降，表明在急性缺血性脑卒中急性期免疫炎性反应被激活，CD4+T细胞可能以诱导分化成促炎细胞因子为主，而具有免疫抑制功能的Treg细胞数量和功能则受到抑制，从而加重了脑组织损伤。而患者外周血CD4+CD25+CD127lowT细胞和CD4+CD25highT细胞比例在发病8~14 d逐渐恢复至正常水平，则可能在缺血性脑卒中恢复期，机体内诱导产生大量的Treg细胞，从而抑制免疫炎性反应的发生，促进脑组织神经元的修复。 3 研究结果与意义 图1 各组外周血 CD4+CD25+CD127low T细胞表达Fig.1 The expression of CD4+CD25+CD127low T cells in different groupsA:对照组；B：24~48 h组；C:3~7 d组；D：