2012 食品酶学-2课件.ppt

第2章 酶的生产与分离纯化 主要内容 2.1 国内外酶制剂工业生产及应用现状 2.2 酶的发酵技术（重点） 2.3 酶的分离纯化（难点重点） 2.4 酶分离、纯化的评价 2.5 酶的剂型与保存 2.1.1 新技术在生产中的应用 三种方法 组织提取：木瓜蛋白酶、凝乳蛋白酶 微生物发酵：最大量的来源 化学及生物合成：生物重组 高新技术的应用 酶的修饰、固定化、基因重组、膜分离技术、冷冻干燥、微胶囊 2.1.2 集中垄断，市场全球化 规模企业由20世纪80年代初的80多家减少至20多家，占市场90% 丹麦诺和诺得公司（诺维信novozymes）→1978年进入中国诺维信公司，占50%市场（天津）； 美国杰能科公司（Genencor）→98年进入中国，与无锡合资，控股80%（无锡），两家公司销售额占全球2/3；（2005年杰能科国际公司被丹尼斯克公司收购）； 芬兰科特公司和丹麦丹尼斯克公司酶制剂业务合并，Pfizer，Rhone，SKW , Biosystems，日本天野 2.1.3 品种、规模不断扩大 目前30多家600多个品种，应用于18个工业领域; 我国2000年酶制剂产量为30万吨，100家，市场份额仅占5%，以未经除菌去渣的粗制品粉状酶为主; 国际以液体、颗粒为主; 国内糖化酶、ａ-淀粉酶、蛋白酶三大类占97%; 重要产品普鲁兰酶、真菌淀粉酶、系列果胶酶、低温碱性蛋白酶，国内尚未投入生产; 我国有7家上市公司介入酶制剂开发生产。 2.1.4 应用领域不断扩大 美国酶制剂年产值6.25亿美元，食品工业占62%，拓展饲料工业、洗涤剂工业、化学工业。 2.2 酶的发酵技术 利用微生物产酶的优点： (1) 微生物种类多、酶种丰富，且菌株易诱变，菌种多样。 (2) 微生物生长繁殖快，易提取酶，特别是胞外酶。 (3) 微生物培养基来源广泛、价格便宜。 (4) 可以采用微电脑等新技术，控制酶发酵生产过程，生产可连续化、自动化，经济效益高。 (5) 可以利用以基因工程为主的现代分子生物学技术，选育菌种、增加酶产率和开发新酶种。 2.2.1 产酶微生物 菌种是发酵生产酶的重要条件。目前投入工业发酵生产的酶约有50～60种，包括细菌、放线菌、酵母菌、霉菌。 2.2.2 酶的发酵技术 2.2.2.1 培养基 培养基的营养成分是微生物发酵产酶的原料，主要是碳源、氮源，其次是无机盐、生长因子和产酶促进剂等。 （1）碳源 碳素是构成菌体成分的主要元素，也是细胞贮藏物质和生产各种代谢产物的骨架，还是菌体生命活动的能量的主要来源。 当前酶制剂生产上使用的菌种大都是只能利用有机碳的异养型微生物，主要来源：农副产品中如甘薯、麸皮、玉米、米糠等淀粉质原料；野生的如土茯苓、橡子、石蒜等淀粉质原料。 此外，以石油产品中12～16碳的成分来作碳源，如以某些嗜石油微生物生产蛋白酶、脂酶，均已获得成功。 （2）氮源 氮是生物体内各种含氮物质，如氨基酸、蛋白质、核苷酸、核酸等的组成成分。 酶制剂生产中的氮源主要有有机氮源和无机氮源两种，有机氮源有：豆饼、花生饼、菜籽饼、鱼粉、蛋白胨、牛肉膏、酵母膏、多肽、氨基酸等；无机氮源有：(NH4)2SO4、NH4Cl、NH4NO3、(NH4)3PO4、尿素等。 一般来说，动物细胞要求有机氮，植物细胞主要要求无机氮。 （3） 碳氮比 在微生物酶生产培养基中碳源与氮源的比例是随生产的酶类、生产菌株的性质和培养阶段的不同而改变的。 一般蛋白酶 (包括酸性、中性和碱性蛋白酶) 生产采用碳氮比低的培养基比较有利；淀粉酶(包括α-淀粉酶、糖化酶、β-淀粉酶等)生产的碳氮比略高。 以上是蛋白酶和淀粉酶生产培养基碳氮比的一般规律，但是由于菌种很多而其性质各异。很难说都是符合上述规律的。 （4） 无机盐 微生物酶生产的培养基中需要有磷酸盐及硫、钾、钠、钙、镁等元素存在。 在天然培养基中，一般微量元素不必另外加入，但也有一些例外。 （5）生长因子 微生物还需一些微量的像维生素一类的物质，才能正常生长发育，这类物质统称生长因子(或生长素)。包括某些氨基酸、维生素、嘌呤或嘧啶等。 酶制剂生产中所需的生长因子，大多是由天然原料提供，如玉米浆、麦芽汁、豆芽汁、酵母膏、麸皮、米糠等。 （6） 产酶促进剂 产酶促进剂是指在培养基中添加某种少量物质，能显著提高酶的产率，这类物质称为产酶促进剂。 产酶促进剂大体上分为两种：诱导物和表面活性剂。 生产上常采用非离子