藤黄酸对膀胱癌细胞株BIU―87增殖和凋亡的影响.docVIP

藤黄酸对膀胱癌细胞株BIU―87增殖和凋亡的影响 　　【中图分类号】R285 【文献标识码】A 【文章编号】1672-3783（2013）11-0605-01 　　【摘要】目的 研究藤黄酸对膀胱癌细胞增殖抑制作用可能的机制。方法不同浓度藤黄酸作用于膀胱癌细胞后，MTT法检测膀胱癌细胞增殖抑制率变化，流式细胞术检测膀胱癌细胞凋亡情况。结果 藤黄酸能明显呈浓度依赖性抑制BIU-87膀胱癌细胞的生长； 经藤黄酸处理后，可以导致BIU-87膀胱癌细胞的凋亡。结论藤黄酸能明显抑制膀胱癌细胞株BIU-87细胞的生长，并促膀胱癌细胞凋亡，这种作用具有明显时间剂量效应。 　　【关键词】 藤黄酸； 膀胱癌； 凋亡； 　　膀胱癌是泌尿系统最常见的恶性肿瘤之一，多发难治，且术后复发率高，严重威胁着人类的健康和生命[1]。膀胱癌的发病率占全身肿瘤1%，占全部恶性肿瘤3%。男女之比为3：l，发病年龄多在50-70岁间。近年来传统中医药在抗肿瘤方面的作用得到了深入的研究，越来越多的中药被应用在肿瘤的治疗当中。藤黄系藤黄科植物藤黄所分泌出的干燥树脂。呈圆柱状或不规则块状物，黄棕色，质脆易碎。藤黄酸（Ggambogic acid， GA，）为藤黄的重要活性成分之一，具有多种生物学功能，包括：抗炎、抗氧化、抗病毒、抗感染的作用[2]，同时还具有良好的体内外抗肿瘤作用，可抑制多种肿瘤细胞的生长，并且诱导肿瘤细胞凋亡。近期的研究表明，GA能抑制包括肝癌、胃癌、乳腺癌以及血液系肿瘤在内的多种肿瘤细胞的生长，其对泌尿系肿瘤作用的报道尚少。 　　本研究对藤黄酸抑制膀胱癌细胞生长的机制作进一步探讨。结果显示，藤黄酸可以抑制膀胱癌细胞增殖并促进膀胱癌细胞凋亡作用。 　　1 材料及方法 　　1.1 GA为江苏康缘药业公司产品，RPMI1640培养液、胎牛血清购自美国Gibco公司，噻唑蓝（M1Tr）、胰蛋白酶购自美国Sigma公司，AnnexinV.FITC凋亡检测试剂盒购自美国BIPEC公司，细胞周期检测试剂盒购自南京凯基公司。人膀胱癌细胞株BIU-87购于中国科学院昆明细胞库。 　　1.2 实验分组 本实验共分为4组，藤黄酸1.0μmol/L组、2.0μmol/L组、3.0μmol/L组及阴性对照组。 　　1.3 细胞传代及培养 膀胱癌细胞生长在含10%胎牛血清的RPMI1640完全培养液中，于37℃恒温、5%CO2、饱和湿度培养箱中，每2-3 d换液传代1次。将长满细胞的培养瓶中原来的培养液弃去。加入0.5～1ml 0.25%胰酶溶液，使瓶底细胞都浸入溶液中。观察消化也可以用肉眼，当见到瓶底发白并出现细针孔空隙时终止消化。一般室温消化时间约为1～3分钟。用吸管将贴壁的细胞吹打成悬液，分到另外两到三瓶中，实践培养液塞好橡皮塞，置37℃下继续培养。第二天观察贴壁生长情况。取对数生长期细胞用于实验。 　　1.4 MTT检测细胞增殖 取对数生长期细胞胰酶消化、细胞计数，以5*105/瓶细胞数转至6孔板培养16h，加无血清培养基同步化12h，进行加药处理，给药浓度分别为1.0μmol/L、2.0μmol/L、3.0μmol/L。将处于对数生长期的骨肉瘤细胞于转染后的第24h、48h加入MTT20μl/孔（5mg/ml），继续培养4h后吸弃上清。加入二甲亚砜150μl/孔，溶解甲瓒紫结晶，酶标仪570nm波长下测定吸光度A值，每孔设3个复孔取均值，计算抑制率。相对抑制率=（1-转染组/ 对照组）×100?。 　　1.5 细胞凋亡实验 取对数生长期细胞胰酶消化、细胞计数，以5*105/瓶细胞数转至6孔板培养16h，加无血清培养基同步化12h，进行加药处理，给药浓度分别为1.0μmol/L、2.0μmol/L、3.0μmol/L。分别给药作用24h和48h后，胰酶消化，离心收集细胞，用冷PBS 洗涤两次，加入100μL 1X annexin-binding buffer溶解，按照凋亡检测试剂盒操作依次加入检测试剂 。流式检测细胞凋亡 。 　　1.6 统计学分析 采用SPSS 121 0 软件包处理数据， 采用单因素方差分析， 以P 01 05 为差异具有统计学意义， 实验数据均重复测定3 次以上。 　　2 实验结果 　　2.1 MTT结果呈现浓度依赖性抑制膀胱癌细胞增殖，藤黄酸 对膀胱癌细胞的增殖抑制如表1所示。结果显示，藤黄酸能明显抑制BIU-87膀胱癌细胞增殖，并且这种抑制作用呈浓度-时间依赖性增强。 　　3 讨论 　　中药藤黄系藤黄属，植物藤黄树的树干被割伤后流出的胶状树脂，呈橙色圆柱状或块状，质脆易碎。藤黄属植物在系统分类上属藤黄科、藤黄亚科、藤黄族、藤黄属。据中国植物志记载，本科约40属，1000种，分别隶属5亚科，主要分布在热带，但有