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国产注射用特立帕肽的过敏性及免疫原性研究 　　[摘要] 目的 考察国产注射用特立帕肽在动物中的过敏性及免疫原性。 方法 对豚鼠和家兔分别于0 d和14 d注射一定浓度的特立帕肽，观察豚鼠全身变态反应及对家兔的免疫原性，并采用ELISA分析家兔血清抗体的变化规律。 结果 给药后豚鼠未见明显全身变态反应。家兔免疫原性实验结果表明，低剂量组（1 μg/kg）血清中的IgE含量经免疫后无明显上升；中剂量组（5 μg/kg）和高剂量组（10 μg/kg）血清中IgE含量在首次免疫后略有快速上升，但随后中剂量组恢复正常，而高剂量组在加强免疫后IgE含量仍有一定上升。 结论 国产注射用特立帕肽在拟定的人用剂量范围内具有很好的安全性，可供皮下注射给药。 　　[关键词] 注射用特立帕肽；皮下注射；过敏性；免疫原性 　　[中图分类号] R392.8 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2013）09（b）-0007-03 　　骨质疏松症是一种以低骨量和骨组织退化为特征的最常见的代谢性骨病。市场上多数治疗骨质疏松症的药物，如雌激素、双磷酸盐类和降血钙素均属骨吸收抑制剂。而其他一些药物，如氟化物、甲状旁腺激素（PTH）是骨形成促进剂[1]。 　　特立帕肽（teriparatide）商品名为Forteo，由礼来公司研制开发，2002年12月在美国首次上市，随后相继在奥地利、丹麦、芬兰、德国、希腊、冰岛、爱尔兰、荷兰、挪威、葡萄牙、瑞士、英国、澳大利亚等国上市[2-3]。本品于2011年进口到我国市场，适用于患骨质疏松症、有高度骨折危险的绝经期妇女[4]，亦适用于有高度骨折危险的原发性或性腺功能减退性骨质疏松症男性患者，包括有骨质疏松性骨折史、有骨折多种危险因素或经评价对先前疗法无效或不耐受的骨质疏松症患者[5]。本品原研产品为重组人甲状旁腺激素（rhPTH）1-34，与内源性PTH类似，可与特异性高亲和性细胞表面受体结合发挥生物学作用[6]。动物实验表明，本品1次/d给药对成骨细胞的刺激作用高于其对破骨细胞的作用，可引起小梁骨和皮质骨表面的新骨生成[7]。此外，可改善小梁骨微结构，并通过刺激松质骨和皮质骨中的新骨生成，增加骨量，提高骨强度。临床研究提示，本品的促合成效应表现为增加骨量、骨形成和再吸收，从而提高骨强度。与安慰剂组病例相比，使用特立帕肽治疗1～2年可使脊骨骨折危险性下降65%，非外伤性非脊骨骨折危险性下降53%[8]。 　　海南双成药业有限公司在进口Forteo的基础上，采用固相合成法成功合成了含34肽的特立帕肽，并采用冻干工艺制备了注射用特立帕肽。因其主药为大分子活性物质，可能激活机体自身的免疫反应[9]，特采用豚鼠全身过敏性试验及家兔免疫原性试验检测其过敏性和免疫原性，为临床用药提供参考。 　　1 材料与方法 　　1.1 试验试剂 　　注射用特立帕肽，海南双成药业有限公司提供，批规格：20 μg；牛血清白蛋白，中国医药集团上海化学试剂公司生产，批号970612；注射用生理盐水，石家庄四药有限公司，批号100425807；Rabbit IgE ELISA试剂盒，美国RapidBio Lab产品。 　　1.2 试验动物 　　豚鼠24只，雌雄各半，平均体重（300±35） g，由浙江省实验动物中心提供。按照普通级别饲养管理，自由饮用消毒自来水，饲料为标准颗粒饲料，黑白光照各12 h，自由活动。 　　新西兰家兔，体重2.0～2.5 kg，由浙江省实验动物中心提供。按照清洁级别饲养管理，自由饮用消毒自来水，饲料为标准颗粒饲料，黑白光照各12 h，自由活动。 　　1.3 试验方法 　　1.3.1 豚鼠全身过敏性试验[10] 　　1.3.1.1 实验动物分组及给药剂量 将豚鼠随机分为4组，每组6只，雌雄各半。分别为葡萄糖注射液阴性组、牛血清白蛋白阳性组、特立帕肽低剂量组（1.587 μg/ml）和高剂量组（4.761 μg/kg）。给药途径均为肌内注射，给药体积阴性组和阳性组分别为0.5 ml/只；特立帕肽高低剂量组均为1 ml/kg。 　　1.3.1.2 溶液配制 根据特立帕肽人用临床单次剂量（20 μg/60 kg）折算得豚鼠的单次给药剂量为1.587 μg/kg，所以受试药物特立帕肽注射剂的低、高剂量组（低剂量的3倍）的单次给药剂量分别为1.587 μg/kg和4.761 μg/kg。 　　①特立帕肽注射剂低剂量组：20 μg注射剂溶解于12.6 ml生理盐水中，得1.587 μg/ml；②特立帕肽注射剂高剂量组：20 μg注射剂溶解于4.2 ml生理盐水中，得4.761 μg/kg；③牛血清白蛋白阳性组：50 mg牛血清白蛋白溶解于5 ml生理盐水中，得终浓度10