化妆品防腐剂效能评价方法》（征求意见稿-环境与健康相关产品安全所.doc

化妆品防腐效能评价方法 The evaluation method for preservative effect of cosmetics （征求意见稿） 20×× -××-×× 发布 20×× -××-×× 实施 目 次 前 言 2 化妆品防腐效能评价方法 3 1. 范围 3 2. 规范性引用文件 3 3. 术语和定义 3 4. 仪器设备 3 5. 培养基和试剂 3 6. 实验菌株 5 7. 实验步骤 5 8. 结果计数和评价 5 前 言 为预防化妆品微生物污染，保证化妆品质量，制定本标准。 本标准由中华人民共和国卫生部归口。 本标准起草单位中国疾病预防控制中心环境与健康相关产品安全所。 本标准主要起草人： 本标准为首次制定 化妆品防腐效能评价方法 范围 本标准规定了化妆品防腐效能的评价方法。 本标准适用于亲水性的膏、霜、乳剂半固体状样品和水溶性的液体等化妆品的防腐效能评价。 规范性引用文件 GB 7918—87 化妆品微生物标准检验方法 术语和定义 本标准采用下列定义： 防腐效能评价方法即微生物挑战性实验：将一定量的微生物加入到化妆品中，模拟可能出现的污染情况，然后每隔一定时间检测微生物增减的数量，以此来判断防腐剂的防腐效能的实验方法。 4.仪器设备 4.1 生物安全柜 4.2 高压蒸汽灭菌器 4.3 冰箱：4℃ 4.4 恒温培养箱： 36±1℃；27±1℃ 4.5 比浊仪 4.6 均质器 4.7 旋涡振荡器 4.8 天平：精确至0.01g 4.9 恒温水浴锅 4.10 灭菌培养皿：直径90mm 4.11 灭菌试管：16×160mm 4.12 灭菌刻度吸管：1mL (具0.01mL刻度)、10mL (具0.1mL刻度) 4.13 灭菌锥形瓶：500mL 4.14 灭菌试剂瓶：100 mL 4.15 玻璃珠：直径约5mm 5.试剂和培养基 5.1 生理盐水：按GB 7918.1-87中2.1.1方法配制。 5.2 含0.05%吐温80的生理盐水： 成分：氯化钠 8.5g 吐温80 0.5g 蒸馏水加至 1000mL 溶解后，分装到加有玻璃珠的三角瓶内，103.43kPa（121℃ 15 lb）20min高压灭菌。 5.3 改良的 LETHEEN 肉汤 成分：牛肉膏 5.0 g 3号示蛋白胨 20.0 g 胰蛋白胨 5.0 g 酵母浸膏 2.0g 吐温 80 5.0 g 卵磷脂 0.7 g 氯化钠 5.0 g 亚硫酸氢钠 0.1g 蒸馏水 加至1000mL 将上述成分加入到蒸馏水中，加热溶解，冷却后调节pH为7.2±0.2，103.43kPa（121℃ 15 lb）15min高压灭菌。 5.4水解大豆琼脂培养基（TSA培养基）： 成分：胰蛋白胨 15.0g 大豆蛋白胨 5.0g 氯化钠 5.0g 琼脂 15.0g 蒸馏水 加至1000mL 将上述成分加入到蒸馏水中，加热溶解，冷却后调节pH为7.3±0.2，103.43kPa（121℃ 15 lb）20min高压灭菌。 5.5马铃薯葡萄糖培养基（PDA）： 成分：马铃薯 300.0g 葡萄糖 20.0g 琼脂 20.0g 蒸馏水 1000mL 将马铃薯去皮切块，加1000mL蒸馏水，煮沸10～20min。用纱布过滤，加蒸馏水至1000mL，加入葡萄糖和琼脂，加热融化。68.95kPa（115℃ 10 lb）20min高压灭菌。 6.实验菌株 6.1细菌：金黄色葡萄球菌ATCC6538，大肠杆菌ATCC8739，铜绿色假单胞菌ATCC9027，采用TSA培养基传代培养，需使用5代以内的菌种。 6.2真菌：黑曲霉ATCC16404，白色假丝酵母ATCC10231，采用PDA培养基传代培养，需使用5代以内的菌种。 根据实际情况可增加其他细菌作为测试菌株。 7.实验步骤 7.1样品准备：取包装完好的待测化妆品样品2份，在无菌条件下各称取30g于灭菌试剂瓶中，备用。 7.2细菌悬浊液的制备：将以上3种细菌分别接种到TSA斜面培养基上，37℃培养2 4~48小时。用5ml灭菌0.85%生理盐水