细胞工程-第三章细胞培养的基本方法.pptVIP

最严峻的挑战-污染 (contamination) 细胞培养的污染问题十分重要，一旦发生污染，将导致前功尽弃。所以细胞培养一定要建立无菌观念。遇到培养污染要分析原因，及时处理。 培养细胞一旦发生污染多数将无法挽回，加入抗生素也基本无能为力。特别是霉菌和细菌。 1.细胞培养中常见的污染物有细菌、酵母菌、真菌、支原体和病毒等。 在出现以下情况时培养的细胞可能有污染： a.培养液的酸碱度发生异常的改变。 b. 培养液出现混浊。 c. 光镜观察到菌丝和颗粒。 d. 细胞出现死亡或增殖缓慢等 2.常见污染及判断 2.细菌污染：常见革兰氏阴性菌（白色葡萄球菌） 、大肠杆菌、假单胞菌。 现象：初期变化不明显，后期培养液浑浊，镜下可见菌体。 预防：青霉素和链霉素可预防。 3.真菌污染 ：常见烟曲霉、黑曲霉、毛霉菌、孢子霉、白念珠菌、酵母菌等。 特点：大多呈白色或浅黄色小点漂浮于培养液表面；镜下呈丝状、管状或树枝状，纵横交错，散在细胞周边和细胞之间。 抗真菌制剂可预防和排除真菌污染。 4.支原体污染：介于细菌和病毒之间，能独立生活的最小微生物。 最常见、不易察觉；大小介于0.2-2 μm，约1%可通过滤菌器 对酸耐受性差，对热较敏感，青霉素无效 。 “正常”感觉 。 支原体污染细胞后，能抑制细胞代谢和生长，改变核酸合成，影响细胞的抗原性，引起细胞染色体