动物细胞工程第三章动物细胞融合与杂交.pptVIP

第三章 动物细胞融合与杂交 一、细胞融合和杂交概述 二、细胞融合方法 三、融合子的检出与鉴定 四、杂交瘤技术 第一节 细胞融合与杂交概述 一.概念和目的 细胞融合：自然或人为条件下，两个或两个以上细胞相互接触，发生膜融合、胞质融合和核融合形成融合细胞的现象。 细胞杂交：不同类型的细胞之间发生的融合叫做细胞杂交。（种间杂交、种内杂交） 目的：获得杂种优势 第二节 细胞融合的方法 一、细胞融合的一般过程 细胞融合过程可分为： 凝集：细胞凝集与细胞膜的糖蛋白有关 蛋白质分子重新分布：是细胞融合的必要前提 脂质分子重排：是实现细胞融合的关键 胞质合并：后续的稳定步骤。 二．融合方法 最早被采用病毒融合剂有疱疹病毒、天花病毒和副粘液病毒等在内的病毒类融合剂。 灭活仙台病毒介导细胞融合过程可以大大提高融合频率。它在病毒类融合剂中最为有效，使用最广。 使用仙台病毒诱导细胞融合步骤 先将亲本细胞分别制成悬液、混合离心 将沉积细胞悬于1ml灭活的仙台病毒悬液，置冰浴间歇摇动20分钟，细胞凝集 温度升至37℃ ，间歇摇动30分钟，使其进行融合 洗去病毒，即可将融合物悬浮于选择性培养基进行培养。 2．化学诱导融合 它们主要包括聚乙二醇（PEG）、聚乙烯吡咯烷酮（PVP）、聚乙烯醇、聚甘油、溶血卵磷酯、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰胆碱、甘油－醋酸酯、油酸、油胺和