第七节高效液相色谱讲述.ppt

* * * 1、紫外光度检测器 是LC广泛使用的检测器，适用于80%样品 组成:光源、流通池、记录仪 固定波长、可变波长、二极管阵列三种类型。 工作原理：基于被分析试样组分对特定波长紫外光的选择吸收，组分浓度与吸光度关系遵守光吸收定律。 固定波长 检测波长一般固定在245nm和280nm 相当于紫外光度计，为了适应高效液相色谱仪的要求:池体积很小5-10μl，光路长5-10mm,结构采用H型 可变波长实际就是一台装有流通池的紫外分光光度计或紫外光度计。能获得被分离组分的紫外光谱。 * * 紫外检测器特点： 1）灵敏度高，最小检测浓度达10-10g/ml 2) 对温度和流速不敏感，可用于梯度洗脱 3）不破坏样品，可用于制备。 缺点：不适合于对紫外光完全不吸收的试样、需用无紫外吸收的溶剂作流动相。 * * 光电二极管阵列检测器 检测元件： 光电二极阵列，阵列由一系列光电二极管组成，每一个二极管宽50um，各自测一窄段光谱。 普通紫外-可见检测器：光源发出的光经单色器分光，只让特定波长的光进入流动池 二极管阵列检测器：先让所有波长的光通过流通池，然后通过一系列分光技术，使所有波长的光在检测器上被检测，以实际时间瞬时检测在所有波长上的吸光度，得到三维色谱-光谱图，便于定性。 二极管阵列检测器优点： ① 扫描速度快，数据重现性好，灵敏度高适用于痕量分析 ② 可获得三维色谱—光谱图。 * * * * 2、荧光检测器 原理：待测物吸收一定波长的紫外光后发射出荧光，在一定条件下荧光强度与浓度成正比，通过测量荧光强度来确定待测物浓度。实际上是将带有流通池的荧光分光光度计或荧光光度计作为HPLC的检测器 选择性检测器，用于本身能够发射荧光的物质或其衍生物能发射荧光的物质。 灵敏度高，10-13g，比紫外吸收检测器约高二个数量级，适合于痕量分析。 * * * * 3、示差折光检测器 通过连续测定流通池中纯流动相和含有被测组分的流动相之间折光率的差别，根据不同物质具有不同折光率进行组分检测。 只要组分折光率与流动相折光率不同就能用示差折光检测器进行检测。对没有紫外吸收的物质如高分子化合物、糖类、脂肪烷烃都能检测。 优点： 通用性好，可检测的化合物范围广，尤其在尺寸排阻色谱中用很多。 缺点： 最小检测浓度10-7g/ml,灵敏度不高，对温度变化敏感，不能用于梯度洗脱 * * 4、电化学检测器 利用物质的电学或电化学性质进行分析的检测器。主要有：极谱检测器、安培检测器、库伦检测器和电导检测器，前三种统称伏安检测器，以测量电解电流为基础。 电导检测器：直接测量色谱柱后流出液的电导变化来计算物质的含量。 电导检测器响应受温度影响较大，因此要求严格控温。一般在电导池中放置热敏电阻器进行监测。 HPLC分析条件的选择 1分离类型的选择 样品性质（相对分子量、在水中和有机溶剂中的溶解度、极性和稳定性、化学结构） 相对分子量较低，易挥发而且受热又不分解的化合物，可用气相色谱法分离。 相对分子量为200-2000的样品，适用于标准的液相色谱（液液、液固、离子交换色谱等）。 相对分子量大于2000的宜采用尺寸排阻色谱法。 * * * *  液相色谱分离类型选择参考表 溶于水——排阻色谱，水为流动相 相对分子质量 ＞2000 不溶于水——排阻色谱，非水流动相 同系物——分配色谱 不溶于水 异构体——吸附色谱 样品 分子大小差异大——排阻色谱 反相液-液色谱 相对分子质量 溶于水，不离解 ＜2000 排阻色谱，水为流动相 碱——阳离子交换色谱