基因工程的基本操作程序-1.pptVIP

复习 1.基因工程中基本工具有哪些？ 2.基本工具的作用和特点分别是什么？ 3.限制酶、DNA连接酶分别作用于DNA的什么部位？ 4.基因工程的基本步骤是什么？ 5.获得目的基因的方式有哪些？ 真核生物的基因结构 第二节基因工程的基本操作程序 cDNA文库 基因组文库 PCR的反应体系 模板：DNA 原料：四种 脱氧核苷酸； 酶：Taq酶（ TaqDNA聚合酶）嗜热细菌中分离得到 引物：DNA片段 Mg2+（维持酶活性所必需） PCR缓冲液：维持PH恒定，保护Taq酶 ㈡ PCR反应曲线 PCR的应用 PCR具有省时、操作简便、特异性强、灵敏度高、效率高、应用范围广等特点。PCR技术在分子生物学、医学和案件侦破等领域得到广泛应用。 实例 1： 1、下列获取目的基因的方法中需要模板链是（ ） A.从基因文库中获取目的基因 B.利用PCR技术扩增目的基因 C.反转录法 D.通过DNA合成仪利用化学方法人工合成 基 因 枪 法：单子叶植物常用的一种基因转化方法，但成本较高。 将目的基因导入动物细胞 ①方法：显微注射法 ②程序： pBR322质粒结构 2.检测目的基因的表达 导入微生物细胞 将目的基因克隆到大肠 杆菌细胞中的操作步骤： 1)获得目的基因和质粒载体； 2)形成重组质粒； 3)制备感受态细胞，用重组质粒转化大肠杆菌细胞；