实验12 PCR技术.PPTVIP

3、引物的延伸：DNA模板-引物结合物在Taq DNA聚合酶的作用下，以dNTP为反应原料，靶序列为模板，按碱基配对与半保留复制原理，合成一条新的与模板DNA 链互补的半保留复制链。 重复循环变性--退火--延伸三个过程，就可获得更多的“半保留复制链”，而且这种新链又可成为下次循环的模板。每完成一个循环需2～4分钟，2～3小时就能将待扩目的片段富集106～109倍。所需循环次数取决于样品中模板的拷贝。 （一）无扩增产物 （三）拖尾现象 （四）假阳性 七、常规PCR技术及几类PCR新技术 温度梯度PCR 不对称PCR 热启动PCR 原位PCR Touch-down PCR 连接酶链反应 RT-PCR RACE-PCR 荧光定量PCR AFLP 兼并引物PCR 巢氏PCR 免疫-PCR(immuno-PCR) 反向PCR MSP甲基化特异 PCR 八、PCR的应用 研究 基因克隆，DNA测序，分析突变 诊断 细菌、病毒、寄生虫检测，基因诊断 人类基因组工程 遗传图谱的构建，DNA测序，表达图谱 法医 犯罪现场标本分析 肿瘤 各种肿瘤检测 其他…… 实验十一 聚合酶链式反应技术 （PCR） 一、实验目的 掌握PCR反应