实验八 肝脏DNA提取.pptVIP

实 验 肝脏DNA提取 实验目的 掌握基因组DNA提取的原理和实验操作细节； 熟悉实验动物的取材方法及组织匀浆制备方法； 了解试剂盒提取质粒DNA方法和原理，离心机的分类； 一般过程 破碎细胞 提取核蛋白 DNA核蛋白和RNA核蛋白分离 蛋白和核酸分离 原则 低温：抑制DNA酶的活性 操作柔和：防止DNA断链 DNA分离纯化的原理 DNA或DNP在0.14MNaCl盐溶液中溶解度很低，而RNA则溶于0.14MNaCl盐溶液，利用这一性质可将生物组织中的DNA与RNA分开 DNA在生物体内是与蛋白质形成复合物的形式存在的，因此提取脱氧核糖核蛋白复合物-DNP后，必须将其中蛋白去除 其中蛋白质部分可用SDS使之变性除去（同时破坏核酸分解酶）。 进一步纯化则利用氯仿-异戊醇震荡除蛋白，震荡时，蛋白质变性，形成凝胶，并与DNA分开，DNA则留在水层中。 利用DNA不溶于乙醇，因而用乙醇将DNA 从溶液中沉淀出来。 离心机的使用 平衡 对称放入，盖上盖 设定转速、时间 离心开始 完全停止后开盖 实验步骤 1、取新鲜猪肝4g，用0.14mol/L NaCl — 0.15mol/LEDTA溶液洗去血液，剪碎。加入10ml 0.14mol/L NaCl — 0.15mol/L EDTA溶液，置匀浆器中研磨。（初步破碎细胞）。（已做） 2、取一支5mlEP管，装入糊状物（基本装满），离心5mi