实验七 肝脏dna的粗提取.pptVIP

实验原理 要获得DNA样品，必须考虑以下几点： ⑴如何选材，如何破碎组织细胞？ ⑵如何除去蛋白质？在真核细胞内，DNA与蛋白质结合成核蛋白形式。因此，分离DNA时必须使其与蛋白质解离，并除去蛋白质。 ⑶设法除去RNA的污染； ⑷防止DNA酶的降解作用。 (一)选材 要提取动物组织DNA，一般选择细胞膜较脆弱，容易破碎的动物脏器，如胸腺、肝脏、脾脏、胰脏、精子等。 (二)细胞破碎方法： 机械物理法：研磨、组织捣碎、反复冻融法、超声波处理法等。 化学方法：有机溶剂，SDS。 (三)除去RNA的方法 脱氧核糖核蛋白在浓NaCl（1-2mol／L）溶液中溶解度很大，但在0.14mol／L NaCl溶液中溶解度很低，而核糖核蛋白则溶于0.14mol／L NaCl溶液中，利用这一性质可将脱氧核糖核蛋白与绝大部分核糖核蛋白分离开来。 (四)除去蛋白质的方法 DNA在生物体内是与蛋白质形成复合物的形式存在的，因此提取脱氧核糖核蛋白复合物-DNP后，必须将其中蛋白去除。 其中蛋白质部分可用SDS使之变性除去（同时破坏核酸分解酶）。 用氯仿一异戊醇混合液振荡核蛋白溶液，使蛋白质变性，然后离心除去变性蛋白质，此时蛋白质凝胶停留在水相及氯仿相中间，而DNA溶于上层水相。用两倍体积95％乙醇溶液可将DNA钠盐沉淀出来。 (四) DNA的沉淀 乙醇与核酸不会起任何化学反应，对DNA很安全，因此是理想的