实验三 双缩脲法测定蛋白质含量.pptVIP

蛋白质在碱性溶液中也能与硫酸铜发生相同反应，产生紫红色络合物。 蛋白质含有两个以上的肽键，因此，有双缩脲反应，在碱性溶液中蛋白质与Cu2＋形成紫红色络合物，其颜色的深浅与蛋白质的浓度成正比，而与蛋白质的分子量和氨基酸成份无关。 在一定的实验条件下，未知样品的溶液与标准蛋白质溶液同时反应，并于540～560nm下比色，可以通过标准曲线法或对照法求出未知样品的蛋白质浓度。 二 实验操作 比色皿的使用 1.由于紫外光不能透过玻璃比色皿，紫外光区测量时要用石英比色皿。 2.同组使用的比色皿必须配套（规格、新旧程度一致）。 3.比色皿2光面与2毛面，光学表面对准光路，不能有任何污损，否则会引起光吸收的增加。 4.比色皿中所盛溶液不能太少，也不能太多，一般所盛液体约占全部容积的2/3。 5.腐蚀性溶液不得长期盛放在比色皿中。 6.每次使用后,应立即倒空，然后用水冲洗比色皿。 空白管的作用 测量过程中，因比色皿本身和溶剂也会产生一定的光吸收，故设置一个空白管，即其中除了待测溶质以外，其它的成分完全相同。 测量时，首先以空白管对准光路对仪器调零，既消除比色皿本身对光的吸收，又消除了非待测物对光的吸收，所测值即为待测物造成的光吸收。 谢 谢 实验 双