休热克反应与哺乳动物的高海拔（缺氧）适应--本科毕业论文.doc

中国科学院研究生院 博士学位论文 热休克反应与哺乳动物的高海拔（缺氧）适应 申请学位级别 博士 学科专业名称 资源动物学 培养单位 中国科学院西北高原生物研究所 论文摘要 热休克反应与哺乳动物的高海拔（缺氧）适应 本研究对生物的适应性进行了细致的探讨和研究，利用免疫学和分子生物学手段研究哺乳动物的高海拔（缺氧）适应, 通过哺乳动物热休克反应(Hsp)，了解Hsp在生物体高海拔（缺氧）适应中的意义。 1.从高海拔到低海拔的途径（自然缺氧）：用Western Blot和常规RT-PCR及实时荧光定量PCR（Real-time PCR Detection）测定不同海拔哺乳动物（牦牛）心肌组织中热休克蛋白70（Hsp70）的表达差异和脑组织中hsp70基因的自然表达。 2.从低海拔到高海拔的途径(缺氧诱导)：将低海拔哺乳动物（家兔）直接送达不同高海拔地区（海拔2200﹑3300﹑5000米）喂养三周后宰杀，再用RT-PCR测定其脑组织中Hsp70基因的诱导表达。 3. 药物刺激可引起的Hsp70的表达, 抗缺氧物质(即红景天胶囊，石榴籽超临界萃取物， 塞隆肉超临界萃取物)灌喂的小鼠测定密闭缺氧存活时间; 测定经抗缺氧物质(即红景天胶囊，石榴籽超临界萃取物， 塞隆肉超临界萃取物)灌喂的小鼠Hsp70的表达。 结果显示: 1. 热休克反应中Hsp70的快速合成有利于维持应激时细胞的正常生理功能，Hsp70的表达存在着阈值, 热休克反应的最佳条件是海拔5000米，超过海拔6000米时热休克反应减弱, Hsp70生成量与细胞的耐缺氧能力成正比。 2.不同海拔哺乳动物都具有热休克反应基因，应激时高海拔哺乳动物Hsp70表达快速升高；Hsp70可被高海拔（缺氧）诱导产生。 3. 抗缺氧物质(即红景天胶囊，石榴籽超临界萃取物， 塞隆肉超临界萃取物)灌喂的小鼠密闭缺氧存活时间均延长,且均出现Hsp70的表达,说明不经过高原缺氧诱导，在平原使用药物后，Hsp70的表达出现，抗缺氧药物可诱导Hsp70的表达，抗缺氧药物研究可以在平原完成,Hsp70可以作为抗缺氧药物的研究和测试指标之一。 关键词： 热休克反应 热休克蛋白70（Hsp70） Western Blot RT-PCR 实时荧光定量PCR 高海拔缺氧 哺乳动物 应激 糖代谢 抗缺氧药物 诱导 Abstract: Heat Shock Response and Mammal Adaptation to High Elevation (Hypoxia) The mammals high elevation (hypoxia) adaptation was studied by using the immunological and the molecular biological methods to understand the significance of Hsp (hypoxia) adaptation in the organic high elevation, through the mammal Heat Shock response (Hsp). 1.From high elevation to low elevation (natural hypoxia): Western blot and conventional RT-PCR and real-time fluorescence quota PCR were adopted. Expression difference of heat shock protein of 70 (Hsp70) and natural expression of brain tissue of Hsp 70 gene was determined in the cardiac muscle tissue among the different elevation mammals (yak). 2.From low elevation to high elevation (hypoxia induction): The mammals (domestic rabbits) from the low elevation were sent directly to the areas with the different high elevations like 2,200, 3,300 and 5,000 meters