不规则抗体筛选__培训课件.ppt

抗体筛选检查 祁新华 2012.09.28 《临床输血技术规范》 明确规定部分病人应做“抗体筛选”检测，第四章第17条：“凡遇以下情况必须按《全国临床检验操作规程》有关规定做抗体筛选试验：1、交叉配血不合的； 2、对有输血史、妊娠史或短期内需接受多次输血者。 为什么要开展输血前的“抗体筛选”检查 1、目前已知红细胞有26个抗原系统（确认21个，如ABO、Rh、MN、LW、MNS、JK等），500多种抗原（确认200多种）。红细胞抗原的多样性决定了抗体的多样性，检测抗A、抗B、抗D（ABO血型、Rh血型）可确保绝大多数病人的输血安全，但仍不能避免因血型不合（ABO、Rh血型以外）而引发的溶血。 2、临床有的病人出现慢性（迟缓性）溶血反应，易忽视或引不起临床医师重视。 （理论上讲，成年人每输1U的浓缩红细胞，在不丢失、不被破坏（溶血）的前提下，应能提升Hb5-10g/L (0.5-1g/dl),保持15-30天。如果输3-4U RBC，病人Hb上升不到10g/L，或几天后（1周内）Hb仍旧下降到原来水平，甚至更低。这种情况，就要考虑是否有慢性溶血反应存在。） 3、有利于早期发现和确认具有临床意义的抗体，获得充足的时间来选择相配合的血，避免由于寻找不到相合的血液而造成患者病情的延误。 抗体筛选检查 一、什么叫“抗体筛选”检查 1、不规则抗体的含义：通常把抗A、抗B以外的所有红细胞血型抗体称为不规则抗体。如抗D、抗N、抗M、jk-抗体。 2、“抗体筛选”的含义：用具备有临床意义的血型抗原的O型红细胞，检测病人血清（含多种抗体）；如果出现聚集现象，则提示病人有不规则抗体存在，可判为“抗体筛选”阳性。 抗体筛选技术要求 尽可能多的检测出有临床意义的抗体。 尽可能少的检测出无临床意义的抗体。 尽可能快的完成抗体检测 方法选择：每种方法都有自己的特点，适应于不同范围及情况 盐水法：可以用于检测干扰ABO定型的盐水反应活性抗体，如：MN、P血型抗体。但此方法会检查出无临床意义的抗体，如冷凝集素抗－I及抗－IH等，而且会漏检IgG性质的抗体。 低离子聚凝胺法（LIP-IAT）：所需试验时间少（3～5分钟）、方法灵敏度高，准确性高，但无法排除无临床意义抗体的干扰。 间接抗人球方法：是很灵敏且有效的检测抗体的方法，同时此方法可以有效的避免无临床意义抗体的干扰。缺点：耗时间长，步骤多。 试剂 抗体筛选用红细胞悬液（1#、2#、3#） 试剂红细胞必须含有下列抗原：D,C,E,c,e,M,N,S,s,P1,Lea,Leb,K,k,Fya,Fyb,Jka,和Jkb LIM 液、Polybrene及重悬液 抗球蛋白血清 受检者血清 受检者5%红细胞悬液 盐水法 原理：盐水介质中的红细胞膜上的抗原与相应抗体结合，交叉联结形成肉眼可见的凝集块。 实验步骤 取4支小试管，按表标记及加入相应试剂。 1# 2# 3# 自 身 受检者血清 2滴 2滴 2滴 2滴 筛选用红细胞悬液1# 1滴 筛选用红细胞悬液2# 1滴 筛选用红细胞悬液3# 1滴 受检者5%红细胞悬液 1滴 混匀后3400rpm离心15秒，立即观察结果 同前 注意事项 标本编号清楚！！ 试剂红细胞是保存在保存液中，一旦用生理盐水或Liss液洗涤后则应该在24小时内使用，否则会因污染、抗原丢失导致试验错误。 加血清和红细胞悬液的量必须准确不能多加，少加,以免引起前带和后带效应 转速不能太快或太慢、时间不能过长或过短，以免引起假阳性或假阴性。 Polybrene法 原理：聚凝胺是一种多价阳离子聚合物，在溶液中有多个阳离子集团，能中和红细胞表面的负电荷，并借助正负电荷的作用，引起红细胞的非特异性凝聚，这种凝聚是可逆的。当红细胞与血清在低离子介质中孵育，IgG抗体与红细胞上相应抗原结合后，在聚凝胺的作用下发生凝集，凝聚和凝集外表上不能区分，加入枸橼酸钠重悬液后，枸橼酸根的负电荷中和了聚凝胺上的正电荷，使红细胞凝聚现象消失，而真正的凝集不消失。(见图). 实验步骤 取4支小试管，按表标记及加入相应试剂。 1# 2# 3# 自 身