微生物测定标准操作规程CP..docVIP

起草人 Prepared by: 起草日期 Date: _____________________ QC 审核Reviewed by: 审核日期Date: _____________________ QC 审核Reviewed by: 审核日期Date: QA 批准人Approved by: 批准日期Date: 质量部QD 颁发部门 Issued by 执行日期 Effective Date 替换文件 Replaced For SP-QC-540-06微生物限度测定标准操作规程 复审日期 Review Date 分发部门： Distributed to 分发号Distribution No.: 目的 依据中国药典20版，建立物料微生物限度的标准测定程序，以保证有关物料项下的微生物限度的测定符合药典及现行GMP的要求。 范围 适用于按照中国药典相关规定所进行的微生物限度的测定。 职责 QC检验员负责遵守该规程，负责人负责监督与管理。 内容 微生物计数法 概述 微生物法系微生物限度检查应在 除另有规定外，本检查法中细菌培养温度为30～35℃，霉菌、酵母菌培养温度为℃。 检验量 检验量即一次试验所用的供试品量（g、ml或cm2）。 除另有规定，一般供试品的检验量为10g或10ml；膜剂为100cm2；贵重物料、微量包装的检验量可以酌减。要求检查沙门菌的供试品，其检验量应增加0g或0ml。 供试液的制备 根据供试品的理化特性与生物学特性采取适宜的方法制备供试液。供试液制备若需要加温时，温度应不超过45℃。供试液从制备至加入检验用培养基，不得超过1小时。 水溶性供试品 取供试品10，至100ml，混匀，作为1：10供试液。取供试品10，至100ml，混匀，作为1：10供试液。取供试品10， 需氧菌总数、 大豆酪蛋白消化琼脂或大豆酪蛋白消化肉汤用于测定需氧菌总数；沙氏葡萄糖琼脂用于测定霉菌和酵母菌总数。 阴性对照试验：以稀释液代替供试液进行阴性对照试验，阴性对照试验应无菌生长。如果阴性对照有菌生长，应进行偏差调查。 平皿法 平皿法包括倾注法和涂布法。 倾注法：除另有规定外，取规定量供试品，按1.4进行供试液制备，取供试液1ml，置直径90mm的无菌平皿中，注入15～20ml温度不超过45℃熔化的大豆酪蛋白消化琼脂或沙氏葡萄糖琼脂培养基，混匀，凝固，倒置培养。 涂布法：取15～20ml温度不超过45℃的大豆酪蛋白消化琼脂或沙氏葡萄糖琼脂培养基，注入直径90mm的无菌平皿，凝固，制成平板，采用适宜的方法使培养基表面干燥。若使用直径较大的平皿，培养基用量也应相应增加。每一平板表面接种按1.4制备的供试液不少于0.1ml。 除另有规定外，大豆酪蛋白消化琼脂培养基平板在30～35℃培养3～5天，沙氏葡萄糖琼脂培养基平板在20～25℃培养5～7天，观察菌落生长情况，点计平板上生长的所有菌落数，计数并报告。菌落蔓延生长成片的平板不宜计数。点计菌落数后，计算各稀释级供试液的平均菌落数，按SOP-QC-M009《微生物菌落计数报告规则集结果判断》报告菌数。若同稀释级两个平板的菌落数平均值不小于15，则两个平板的菌落数不能相差1倍或以上。 薄膜过滤法 菌落数报告规则 以相当于1g1ml或10cm2供试品的菌落数报告菌数；若滤膜上无菌落生长，以1报告菌落数（每张滤膜过滤1g或1ml供试品），或以1乘以稀释倍数报告菌数。 控制菌检查 概述 控制菌检查法系用于在规定的试验条件下，检查供试品中是否存在特定的微生物。 供试品检出控制菌或其他致病菌时，按一次检出结果为准，不再复试。 供试液制备及试验环境要求同微生物计数法。 如果供试品具有抗菌活性，应尽可能去除或中和。供试品检查时，若使用了中和剂或灭活剂，应确认有效性及对微生物无毒性。 供试液制备是如果使用了表面活性剂，应确认其对微生物无毒性以及与所使用中和剂或灭活剂的相容性。 供试品检查 供试品的控制菌检查应按经方法适用性试验确认的方法进行。 阳性对照试验 。各供试品量的结果 0.1g或0.1ml 0.01或0.01ml 0.001或0.001ml + + + ＞10+ + - 102＜N＜103 + - - 10＜N＜102 - - - ＜10 稀释液 pH无菌磷酸盐缓冲液