人教版本生物选修一课题3《血红蛋白的提取和分离》学案.docVIP

09-10学年高明区纪念中学 高三 级 生物 科学案 执笔：钟日文 审核： 备课组长签名： 课 题（理） 课型 课时 讲学时间 班级 姓 名 课题3 血红蛋白的提取和分离 新课 2 8月 日 【学习目标】 1、尝试从血液中提取和分离血红蛋白 2、了解色谱法、电泳法等分离生物大分子的基本原理 【重难点】 教学重点：凝胶色谱法的原理和方法 教学难点：样品的预处理；色谱柱填料的处理和色谱柱的装填 【复习】DNA的粗提取和鉴定 完成下列实验步骤： 【基础知识】阅读课本P58－63，完成下列空格 一、凝胶色谱法 1、概念：也称做 ；是根据 分离蛋白质的有效方法。 2、原理 （1）由 构成的凝胶，内部有许多贯穿的的 。 （2）当 不同的蛋白质通过凝胶时，相对分子质量 的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程 ，移动速度 ，而相对分子质量 的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在 移动，路程 ，移动速度 ，从而使 不同的蛋白质分子得以分离。 二、缓冲溶液 1、作用：在一定范围内，抵制 的 对溶液pH的影响，维持pH 。 2、配制：由 种缓冲剂溶解于 中配制而成，通过调节缓冲剂的 就可以得到不同pH范围内使用的缓冲液。 三、电泳 1、概念：指 在电厂的作用下发生 的过程。 2、原理：在一定的 下， 、 等生物大分子的可解离基团会带上 或 ，在 的作用下，这些带电分子会向着与其所带电荷 的电极移动。 3、作用：电泳利用了待分离样品中各种分子 的差异及分子本身的 、 的不同，使带电分子产生不同的 ，从而实现样品中 的分离。 4、方法：常用的电泳方法有 和 。测定蛋白质分子量时通常使用 。 四、实验操作 1、样品处理：通过 、 、 等操作收集血红蛋白溶液。 (1)红细胞的洗涤：目的是 。分离时采取 ，直至上清液中没有 ，表明红细胞已洗涤干净。过程：血液＋柠檬酸钠→低速短时离心→吸出上层血浆→红细胞＋5倍体积生理盐水 →缓慢搅拌10min→低速短时离心→吸出上清液→反复洗涤直至上清液无黄色 (2)血红蛋白的释放：在 和 的作用下，红细胞破裂，释放出血红蛋白。 (3)分离血红蛋白溶液：把 离心后，将试管中的液体用 过滤、除去 ，于 中静置片刻后，分离出下层的 。 2、粗分离：即透析 (1)方法：将血红蛋白溶液装入 ，将 放入一定量适宜浓度的 中，透析 。 (2)目的：将 的杂质除去。 (3)原理：透析袋能使小分子自由进出，而将大分子物质保留在袋内。 3、纯化：通过凝胶色谱柱将相对分子质量较大的杂质蛋白除去。操作如下： (1)凝胶色谱柱的制作。 根据教材图5－19，说出制作色谱柱需要的材料。 ＿　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　。 色谱柱的制作过程：准备材料→加工橡皮塞→安装色谱柱 (2)凝胶色谱柱的装填 ①材料：本实验使用的是 。 ②方法：凝胶用 充分溶胀后。配成 ，一次性 倒人色谱柱内。不能有 存在；不能发生 流干露出凝胶颗粒的现象。 色谱柱的装填过程。 步骤 操作要求 ① 操作要求 色谱柱垂直固定在支架上 ② 计算称量凝胶 根据色谱柱体积计算凝胶用量 ③ 配制悬浮液 凝胶颗粒＋蒸馏水→充分溶胀 凝胶颗粒＋洗脱液→沸水浴 ④ 装填悬浮液 一次性缓慢倒入；轻轻敲打 ⑤ 缓冲液洗