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人胃癌细胞SGC7901 生长抑制作用 摘 要：目的 观察γ -生育三烯酚（γ -tocotrienol）对人胃癌细胞SGC-7901 生长抑制作用。 方法 采用离体细胞培养技术，利用细胞生长曲线，单细胞凝胶电泳法、琼脂糖凝胶电泳等 方法，观察γ-生育三烯酚对SGC-7901 细胞生长抑制及其肿瘤细胞DNA 损伤作用。结果 γ - 生育三烯酚可明显抑制SGC-7901 细胞生长；γ-生育三烯酚可引起人胃癌细胞株SGC-7901 细胞DNA 分子的损伤,且与处理的浓度存在一定的相关性。结论 γ -生育三烯酚对SGC-7901 细胞生长有明显抑制作用，其抑制机制与参与DNA 损伤有关。 关键词：γ-生育三烯酚；人胃癌SGC-7901 细胞；单细胞凝胶电泳 中图分类号： 1. 引 言 生育三烯酚是富含于天然谷物、棕榈油中的一种植物化学物，是维生素E 的一个亚族， 在癌症的化学预防方面起着重要作用。离体实验研究表明，γ-生育三烯酚、富含生育三烯酚 的棕榈油可以诱导多种肿瘤系细胞凋亡，并且主要集中对人乳腺癌、结肠癌、肝癌等的研究 [1-4]。但生育三烯酚的抗癌作用机制至今还不十分明确,未见国外对胃癌影响的相关报道。本 文通过离体培养人胃癌SGC-7901 细胞，研究γ-生育三烯酚对肿瘤细胞中DNA 的损伤作用, 探讨γ-生育三烯酚抑制肿瘤的可能作用机制。 2. 材料与方法 2.1 材料 2.1.1 仪器 ELX800 酶标仪（Bio-Tech 公司），IX 70 型荧光显微镜（Olympus），MCO-17A CO2 培养箱（SANYO 公司）等。 2.1.2 试剂 γ-生育三烯酚（γ-tocotrienol），纯度97％，购于Davos，新加坡。γ-生育三烯酚溶于无 水乙醇，终浓度为0.15％（V/V），噻唑蓝、溴化乙锭购于Sigma公司等。 2.1.3 细胞 人胃癌细胞（SGC-7901）培养 SGC-7901细胞购自北京市肿瘤研究所。该细胞在含1 ％青链霉素、1％谷氨酰胺和10％胎牛血清RPMI 1640（Gibco 公司）培养液中，于37℃、5 ％CO2 培养箱中培养，用0.02％EDTA消化、传代。 - 2 - 2.2 方法 2.2.1 细胞生长曲线测定 将SGC-7901细胞接种于96孔培养板中，每孔10 000个细胞，培养24h 后，换成含不同浓 度 γ-生育三烯酚2％胎牛血清培养液，每个剂量设5个重复，继续培养72h和96h。于培养结 束前4h，各取培养板一块，加入MTT（1.0mg/L）20μl，培养结束后，小心吸出培养液，每 孔加 DMSO 200μl，混匀后于酶标仪波长570nm处测定吸光度A值，绘制曲线，并计算和绘 制细胞增殖曲线。 增殖率（IF, %）＝ [（对照组A 值－本底值）－（试验组A 值－本底值）]／（对照组 A 值－本底值）×100 2.2.2 单细胞凝胶电泳 收集溶剂对照以及阳性对照(500μmol/LH2O2，作用10min)和浓度15、30、60μmol/L的γ- 生育三烯酚作用48h的SGC-7901细胞。将PBS液配制的0.6% 正常融点琼脂糖加热溶解，取 其100μL滴加在磨砂载玻片上，用盖玻片使胶均匀展开，置4℃ 下固化5 min，然后去除盖玻 片，即第一层胶。取新制备的细胞悬液样品10 μL与0.6 %低融点琼脂糖90μL在 37℃下充分 混匀（细胞密度，镜下每视野20～30个细胞）叠加在第一层胶上，立即放上盖玻片使胶均匀 展开，4℃固化10 min，即第二层凝胶。根据需要可以加铺第三层低融点凝胶。取下盖玻片， 将凝胶载玻片浸于新配制的裂解液（2.5 mol/L NaCl、100 mmol/L Na2EDTA、10mmol/L Tris、 1%肌氨酸钠，pH 10；用前加入1% Triton X-100和10% DMSO）中，置4℃冰箱，裂解持续 时间1h。从裂解液中取出载玻片，用去离子水洗去过多的盐，小心用滤纸吸干多余水分，按 一定方向水平移入电泳槽中，将新配制的电泳缓冲液（1 mmol/L Na2EDTA和300 mmol/L NaOH，pH 13）倒入电泳槽，液面高于载玻片2 mm，避光静置30 min。在低温避光条件下 根据不同样品的实际情况摸索出最佳电压和电流设置，电泳时间30～45min。从电泳槽中取 出玻片，用去离子水清洗，滴加50μL溴化乙锭（ethidium bromide，EB），染色5 min后，荧 光显微镜下观察结果，24 h内阅完。在荧光显微镜下，每玻片观察10个视野，计算出拖尾细 胞比率，用目镜测微尺测