第十++微生物的分类与鉴定.ppt

DNA-DNA杂交（固相杂交法） 单链DNA（待测菌株） ↓ 转硝酸纤维素膜 ↓ 加入放射性标志参照菌DNA（单链） ↓ 洗去未杂交DNA ↓ 闪烁计数器计数测定放射强度 结论： 1. DNA同源性≥ 60% （同种） 2. DNA同源性≥ 70% （同亚种） 3. DNA同源性60~ 70% （不同亚种） 4. DNA同源性20~ 60% （同属） （3）16s rRNA作为细菌进化的 计时器 ●生物共有的 ●一定的信息量（1542个核苷酸） ●一定的保守性 ●便于比较研究 16s rRNA核苷酸序列分析： ● DNA-PCR法 提取DNA ↓ PCR扩增16S rRNA基因 ↓ PCR产物纯化 ↓ 16SrRNA基因序列测定 ↓ Genbank检索 ●相似性结果的一般判断： 1. SAB≥97% 同种 2. SAB为85~97% 同属 3. SAB≤85 % 不同属 2．细胞化学组分的鉴定（放线菌） 细胞结构 成分 壁 肽聚糖、化学组分 膜 枝菌酸（棒杆菌酸；分枝菌酸） 甲基萘醌 全细胞 水解糖类 1.细胞壁化学类型（分为9种类型） ----- 氨基酸：DAP（二氨基庚二酸） 、Gly、Lys、Asp、Orn ----糖类：阿拉伯糖、半乳糖 （2）全细胞水解液的糖型 糖类型 特征糖类 A 半乳糖、阿拉伯糖、 B 马杜拉糖 C 无特征糖类 D 木糖、阿拉伯糖 E 半乳糖 3．数值分类法（统计分类法） ------? 相似系数的计算； （1）菌株选择（OUT—操作分类单位） （2）选择实验项目 （3）数字编码 （4）计算机分析 ---- 列出相似度矩阵 ---- 将矩阵图转换成树状谱 结果分析： 1. S （相似值）≥85% （同种） 2. S （相似值）≥65% （同属） 3. S （相似值）≤65% （亲缘关 系较远） 。