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第十一章 吸光光度法 一、光的基本性质 1、电磁波 光是一种电磁波，具有波粒二象性，符合普朗克方程。 E = h·ν = h·c/λ h = 6.63×10-34 J·s = 4.136×10-15 eV·s 计算时应注意各物理量的单位。 2、电磁波谱（下册p33） 3、单色光与复合光 单色光：具有单一波长的光 复合光：由不同单色光所组成的，如太阳光、白炽光。 5、可见光区中光的互补原理 光的互补原理：按一定比例混合，得到白光。混合前的这两种色光称为互补色光。 紫和绿、黄和蓝、橙和青蓝、红和青 二、物质对光的选择性吸收 1、机理：分子外层价电子的跃迁引起。 物质一定，其分子的基态和激发态就具有确定的能量，价电子跃迁过程中吸收光的能量（波长）是确定的，故物质对光的吸收具有选择性。 2、物质呈现颜色与光吸收的关系： 物质的颜色是因物质对不同波长的光具有选择性吸收作用而产生的。 3、吸收光谱：以波长为横坐标，吸光度为纵坐标作图。 * 最大吸收波长：光吸收程度最大处的波长，用λmax表示。 * 吸光度（absorbance） 在可见光区，KMnO4溶液 对波长525 nm附近绿色光 的吸收最强，而对紫色和 红色的吸收很弱。λmax= 525 nm。浓度不同时， 光吸收曲线形状相同， λmax不变，吸光度不同。 四、朗伯-比尔定律（Lambert-Beer law） 当一束平行单色光通过任何均匀、非散射的固体、液体或气体介质时，一部分被吸收，一部分透过介质，一部分被器皿的表面反射。 在吸光光度分析法中，试液和空白溶液分别置于同样质料及厚度的吸收池中，然后让强度为I’0的单色光分别通过这两个吸收池，再测量其透过光的强度。此时反射光强度基本上是不变的，且其影响可以相互抵消。 透射比或透光度 （Transmittance） 透过光强度It与人射光强度Io之比称为透射比或透光度，用T表示溶液的透射比愈大，表示它对光的吸收愈小;相反，透射比愈小，表示它对光的吸收愈大。 朗伯(Lambert J H)和比尔(Beer A)分别于1760和1852年研究了光的吸收与溶液层的厚度及溶液浓度的定量关系，二者结合称为朗伯-比尔定律，也称为光的吸收定律。 当一束强度为I0的平行单色光垂直照射到均匀非散射的长度为b的液层、浓度为c的溶液时，由于溶液中吸光质点(分子或离子)的吸收，通过溶液后光的强度减弱为I： 朗伯-比尔定律：当一束平行单色光垂直照射到均匀非散射的含有吸光物质的溶液后，溶液的吸光度与吸光物质的浓度及吸收层厚度成正比。 这是进行定量分析的理论基础。 比例常数K与吸光物质的性质、入射光波长及温度等因素有关。 3、吸光度的加和性 含有多种吸光物质的溶液，由于各吸光物质对某一波长的单色光均有吸收作用，若各吸光物质的吸光质点之间相互不发生化学反应，当某一波长的单色光通过这样一种含有多种吸光物质的溶液时，溶液的总吸光度应等于各吸光物质的吸光度之和。这一规律称吸光度的加和性。 A总=A1+A2+… 4、K的讨论 Ⅰ吸收系数a 当浓度c用g·L-1，液层厚度b用cm为单位表示，则K用另一符号a来表示。 a称为吸收系数，单位为L·g-l·cm-1，它表示质量浓度为l g·L-1，液层厚度为lcm时溶液的吸光度。 Ⅱ摩尔吸收系数molar absorptivity 当浓度c用mol·L-1，液层厚度b用cm为单位表示，则K用另一符号κ来表示。κ称为摩尔吸收系数，单位为L·mol-l·cm-1，它表示物质的量浓度为l mol·L-1，液层厚度为lcm时溶液的吸光度。最大吸收处的摩尔吸收系数κmax Ⅲ桑德尔(Sandell)灵敏度S S是指当仪器的检测极限A=0.001时，单位截面积光程内所能检测出来的吸光物质的最低含量，其单位为μg·cm-2，S与κ及吸光物质摩尔质量M的关系为： §11.2 吸光光度法的仪器 一、目视比色法 colorimetry 用眼睛观察、比较溶液颜色深度以确定物质含量的方法。优点是仪器简单，操作简便，适宜于大批试样的分析。灵敏度高，因为是在复合光-白光下进行测定，故某些显色反应不符合朗伯-比尔定律时，仍可用该法进行测定。主要缺点是准确度不高，标准系列不能久存，需要在测定时临时配制。 二、分光光度计的构成 分光光度计按工作波长范围分类，紫外、可见分光光度计应用于无机物和有机物含量的测定，红外分光光度计主要用于结构分析。分光光度计又可分为单光束和双光束两类。以可见分光光度计为例介绍。 分光光度计的基本部件:光源、分光系统、吸收池、检测系统和