藥物量效曲线及竞争性拮抗剂的pA的测定.docVIP

药物量效曲线及竞争性拮抗剂的pA2的测定 [适用对象] 药学、药剂学专业 [实验学时] 3学时 一、实验目的 学习激动剂量效曲线方法，计算竞争性拮抗剂的pA2值 实验原理在一定范围内药物随剂量或浓度的增加，效应也相应增加。以效应为纵坐标，剂量的对数值为横坐标，可绘制对称的“S”型曲线。本实验选择对M、N受体有兴奋作用的乙酰胆碱（Ah），应用蟾蜍腹直肌为标本（含N2受体）进行实验，按累积浓度进行实验，观察Ah剂量的增加，肌肉收缩效应的变化，从而绘制量效关系曲线。蟾蜍 器材氧气瓶、器官浴槽、铁支架、双凹夹、肌张力换能器、板、100μl微量注射器、10ml注射器、手术剪、眼科剪、眼科镊、培养皿、烧杯、丝线、计算机 10-4～10-1mol·L-1乙酰胆碱，10-3molL-1筒箭毒碱，任氏液 任氏液 2.标本制备与固定：取蟾蜍一只，断头处死，背位固定于蛙板上。剪开腹部皮肤，暴露腹直肌。在耻骨端及胸骨端，各以细线结扎，并自腹白线将两片腹直肌分离。将剪下的腹直肌标本，其一端固定于标本板固定钩上，迅速移至含有10ml任氏液的器官浴槽中，通入混合气体；另一端与张力传感器相连，调节微调器，使标本负荷1g，平衡0.5h，平衡期间每间隔15min更换一次营养液。 给药方法及曲线描记 按半对数摩尔浓度累积给药法，依次加入激动剂Ah，其方法见表：原始浓度（molL-1） 抽取量（μl） 浴槽终浓度（molL-1） 10-5 10 1×10-8 10-5 20 3×10-8 10-5 70 1×10-7 10-4 20 3×10-710-4 70 1×10-6 10-3 20 3×10-6 10-3 70 1×10-5 10-2 20 3×10-5 10-2 70 1×10-4 10-1 20 3×10-4 10-1 70 1×10-3 …… …… …… 按上述方法给药，当达到最小有效浓度后，每加一次药，将出现一次收缩，待收缩反应达最大时，立即加入下一剂量，直至加药后收缩反应不再增加，即达最大效应，即描记出Ah的量效曲线（第一条量效曲线）。连续用10ml营养液冲洗标本两次，再每间隔15分钟更换一次营养液，直至收缩张力恢复到正常（收缩张力曲线回至基线）。然后，加入拮抗剂筒箭毒碱10-3mol·L-1 30μl，即浴槽终浓度为3×10-6 mol·L-1。10min后按上述方法重复制作Ah第二条量效曲线。实验结果?? 1）从剂量反应曲线上求出未加入拮抗剂前激动剂引起mol·L-1），以[A0]表示。加入不同浓度筒箭毒碱ACh的剂量反应曲线右移。从曲线上求出筒箭毒碱ACh产生50%反应所需的浓度（mol·L-1），以[AB]表示。 2）pA2值的计算 的注意事项标本勿用手拿，应以镊子取，亦不能在空气中暴露久，以免失去敏感性。