酶在疾病診断方面的进展研究杨宇轩.docVIP

酶在疾病诊断方面的摘要：关键词：疾病诊断；治疗；应用； 来源 分布 主要应用价值 工艺技术完善程度及主要创新特点 文献来源 脲酶 普通变形杆菌 胞内 血清尿素测定试剂盒 经30 L发酵罐放大培养，优化发酵条件 ［1］ 脲酶 芽胞杆菌 胞内 血清尿素测定试剂盒 经摇瓶发酵培养用尿素诱导提高产率 ［2］ 脂酶 皱落假丝酵母 胞外 血清TG测定试剂盒(对TG水解完全) 经摇瓶培养，使用疏水层析技术分离 ［3］ 葡萄糖氧化酶 点青霉AS.3.3871 胞外 血葡萄糖测定试剂盒 经38 L发酵罐放大培养，使用超滤技术等 ［4］ 已糖激酶 面包酵母 胞内 肌酸激酶测定试剂盒 使用细胞溶涨、冻溶超声粉碎技术 ［5］ 胆红素氧化酶 疣疱漆斑菌 胞外 血清胆红素测定试剂盒 优化发酵条件，100 ml摇瓶培养 ［6］ 胆红素氧化酶 疣疱漆斑菌 胞外 血清胆红素测定试剂盒 摇瓶培养，菌种经紫外线诱变，提高产率 ［7］ 谷氨酸脱氢酶 天津短棒菌T6-13 胞内 血清尿素测定连续检测法试剂盒 对菌种进行诱变处理及摇瓶培养 ［8］ 脂肪酶 猪胰 胞内 血清TG测定试剂盒 酶理化性质及应用研究较为深入 ［9］ 乳酸氧化酶 粪链球菌 胞内 乳酸测定试剂盒 加入Tritonx-100破壁效果好 ［10］ 胆固醇酯酶 假单孢菌 胞外 血清胆固醇测定试剂盒 使用超滤分离技术等 ［11］ 胆固醇氧化酶 节杆菌82菌株 胞外 血清胆固醇测定试剂盒 产酶条件及后提纯工艺优化 ［12］ L-谷氨酸氧化酶 放线菌P-26 胞外 血清rGT测定试剂盒 优化产酶条件 ［13］ 谷氨酸脱氢酶 猪肝 胞内 血清尿素测定试剂盒 纯化工艺及酶稳定性研究 ［14］ 甘油激酶 嗜热脂肪芽孢杆菌 胞内 定量检测甘油试剂盒 应用SIPI-Ⅱ蓝色染料配基层析等分离技术 ［15］ α-磷酸甘油脱氢酶 兔肌 胞内 血清甘油三酯酶偶联试剂盒 建立了液-液双水相提取新技术等 ［16］ 甘油氧化酶 日本曲霉AT008 胞内 血清TG测定试剂盒 发酵罐放大培养 ［17］ 甘油氧化酶 青霉Ts-622 胞外 血清TG测定试剂盒 麦麸固体培养 ［18］ 甘油磷酸氧化酶 气球菌属变异株 　 血清TG测定试剂盒 优化培养条件 ［19］ 胆固醇氧化酶 红球菌属 胞外 血清胆固醇测定试剂盒 优化培养和分离条件 ［20］ 肌酸酶 基因来自黄杆菌sup-188 　 肌酸、肌酐测定试剂盒 构建成基因工程菌并完成基因表达 ［21］ 肌酸酐酶 基因来自假单孢菌属sp.ps-7 　 肌酐测定试剂盒 构建成基因工程菌并进行表达 ［22］  分析上述文献资料，对当前诊断试剂工具酶研究发展趋势可以得出以下几点印象：1.1 通过诱变技术和底物诱导作用等方法，选育出稳定、高产的优良菌株是决定微生物发酵工程成败的关键所在。这对常规发酵生产或进行基因工程菌的构建都是如此。而培育出一种价值很高的目的菌株，是一种能够产生高效益的重大科技创新，应给予重视和支持。1.2 寻找产生胞外酶的菌种，能为酶的提取纯化(下游工程)提供极大的便利。因为胞内酶分离中遇到大量菌体蛋白的干扰，使分离纯化程序复杂化，加大了目的酶的损失。而胞外酶无需破碎细菌细胞，培养液中杂蛋白量少，可用较为简捷的分离纯化方法加以提纯。1.3 对传统的酶分离纯化工艺进行改进，采用温和、高效的生化新技术，如超滤技术、疏水层析技术等，能够显著提高目的酶的纯度和产率。1.4 深化酶理化特性的研究，为诊断试剂配制中正确使用工具酶提供科学依据，是当前研究中一项紧迫的任务。1.5 开辟工具酶的新用途，建立新的临床化学酶分析方法，以代替准确性和精密度均较差的化学方法，是一项很有意义的技术创新。当前已有许多新的工具酶问世，如丙酮酸氧化酶、谷氨酸氧化酶、肌酸酐酶、肌酸酶等均有商品酶供应，提供了建立ALT、AST、肌酐等测定新方法技术的工具酶。在这些方面是有大量工作可作的。1.6 构建诊断试剂工具酶基因工程菌的工作为我们扩展了一个新的研究领域。基因工程菌能够大大提高目的酶的产量(如日本学者构建的肌酸酶基因工程菌肌酸酶占该菌体内的可溶性蛋白的20％以上)，将给工具酶的生产带来革命性的变革。这项工作在国内起步较晚，目前尚未见到成果问世。 2 诊断试剂工具酶理化性质的研究相对滞后 掌握工具酶的理化特性参数对研制和正确使用酶法诊断试剂有指导意义。这些参数包括酶分子量、等电点、Km、最适pH和酸碱耐受范围、最适温度和热稳定性、底物特异性、抑制剂、激活剂和保护剂的种类、剂量等，在新酶研制过程中都应该作出更深入的研究，测出准确的数据。然而，表1所列举的22篇新工具酶研究论文中，对所研究的新工具酶作了Km值测定的仅有5篇；用两种方法同时测定一种酶分子量的仅