蚕豆根尖微核监测技术解析.ppt

* 水体中叶绿素a的测定 * 主要内容 一、实验目的及要求 二、实验原理 三、实验材料及用品 四、实验步骤 五、写出报告，分析样点水质: * 一 、实验目的及要求?： （1）初步了解叶绿素a测定的原理和方法； （2）熟练掌握抽滤装置及分光光度计的使用； （3）通过叶绿素a的含量估算水体中植物的数量，通过植物数量来评价水的质量 二、实验原理 采用纤维微孔滤膜过滤水中藻类，用乙醇浸泡截留了藻类的纤维膜，将藻类细胞中的叶绿素萃取出来，将萃取液离心获得澄清液，以乙醇做参比，用分光光度计测定萃取液在665nm，645nm，630nm处的吸光度数值，采用计算公式计算水中叶绿素a的含量，从而分析了解水质情况 * 三、实验材料及用品： 纤维滤膜、漏斗、真空泵、抽滤瓶、研钵、碳酸镁（0.1g/L）、乙醇（10ml）、离心机、722N可见光分光光度计 四、实验步骤： 1.去青年湖采集样点各采集500ml水样，（进行等分采样，每个样点采三个平行样）分别用纤维滤膜抽滤，抽滤时可加入少量碳酸镁（0.1g/L）；MgCO3的作用是使叶绿素处于弱碱性环境,因为在酸性环境下,叶绿素a中的镁原子容易被氢离子取代,形成脱镁叶绿素，即防止测定过程叶绿素分解。 2.将滤膜剪碎、研磨、放入定量的乙醇中溶解； 3.将溶解液进行离心分离（3000r），然后用722N分光光度计测定665nm，645nm，630nm波段的吸光度； * 4.按Ca=11.57A665-1.31A645-0.13A630计算叶绿素a的浓度。（式中Ca为叶绿素a的浓度，单位为mg/L，A665、A645、A630为叶绿素溶在波长为665nm、645nm、630nm时的吸光度） 五、写出报告，分析样点水质: 叶绿素a含量在（0.1～0.6）mg/m3为贫营养； （0.6～1.6）mg/m3时为贫—中营养； （1.6～4.1）mg/m3为中—富营养； （4.1～10） mg/m3为富营养。 注意事项：1.离心机的配平 2.分光光度计每换一次波长，都要重新调零 * 蚕豆根尖微核监测技术（VMT） * 主要内容 一、实验目的 二、原理 三、器材与试剂 四、操作步骤 五、实验数据的统计处理和污染程度的划分 六、注意事项 * 一、实验目的 学习如何利用高等植物间期体细胞遗传检测系统以监测环境中的致突变物。 二、原理 在细胞分裂早期，若受到有害理化因子的攻击，使染色体发生断裂，产生染色体片段。在这些片段中，有些可能重新愈合恢复正常，随细胞分裂进入子细胞，有些则由于缺乏着丝点，不能移向细胞的极部而变成圆球体，像卫星一样分布在主核的周围，这便是微核，由于染色体片段的大小和数量不一，所以微核的大小和数量也不相同。而蚕豆根尖细胞的染色体大，DNA含量多，因而对诱发物的反应敏感，通过显微镜下的观察和计数，便可监测环境污染。 * 三、器材与试剂 （一）器材 显微镜、温箱、恒温水浴箱、冰箱、手揿计数器、解剖盘、镊子、解剖针、载玻片、盖玻片、试剂瓶、烧杯等显微镜压片实验用具。 （二）试剂 1. 5N HCl 2. 45%醋酸 3. 卡诺氏液（无水乙醇3份加冰醋酸1份配成，固定根尖时随用随备） 4. 席夫氏（Schiff）试剂 5. SO2洗涤液（现用现配） * 四、操作步骤 （一）蚕豆浸种催芽 （1）浸种：将当年或前一年的蚕豆种子按需要量放入盛有有自来水的烧杯中，置25℃温箱内，浸泡20~30小时，此期间至少换水2次，换用的水最好事先置于25℃温箱中预温。 （2）催芽：待种子吸胀后，用纱布松松包裹置解剖盘内，保持温度，在25℃的温箱中催芽12~24小时。待种子初生根露出2~3mm时，再选取发芽良好的种子，放入铺有薄层温脱脂棉的解剖盘内，仍置入25℃的温箱中继续催芽，注意保护湿度。再经36~48h，种子大部分初生根长至2~3cm，根毛发育良好，这时就可用来作为监测水源样品或药物溶液突变效应之间。 * （二）被监测液处理根尖 （1）每一处理选取6~8粒（每人两粒）初生根尖生长良好，根长一致的种子，放入盛有被测液的培养皿中，被测液（0.5mol/L CrO3溶液）浸泡住根尖即可，用自来水（或蒸馏水）处理作对照，方法相同。 （2）处理时间4~6h（1h）。 （三）根尖细胞恢复培养 （1）将处理的种子，用自来水浸洗8次，每次2~3min。