课题3血红蛋白的提取和分离剖析.ppt

2.凝胶色谱操作 凝胶色谱柱的制作 凝胶色谱柱的装填 样品的加入和洗脱 3.SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳 高考链接 1.2009.山东 细胞分化是奢侈基因选择性表达的结果。下列属于奢侈基因的是（ ） A.血红蛋白基因 B.ATP合成酶基因 C.DNA解旋酶基因 D.核糖体蛋白基因 A 解析： 题干中给予“细胞分化是奢侈基因选择性表达的结果”，根据题干可知，找出分化的细胞中特殊成分的基因即可，四个选项中BCD是所有活细胞中都具体的基因，而A.血红蛋白基因是分化后的红细胞才表达的基因。 * 新课导入 下面请看一条新闻 艾滋病研究进展 英国《自然》杂志登论文说，“ＴＲＩＭ５”蛋白质可有效抑制艾滋病病毒的感染。 此后，世界各地的很多科学家开始研究“ＴＲＩＭ５”蛋白质的结构，但到目前为止尚未有人宣称取得突破性进展。 提问 研究“TRIM5”蛋白质的第一步是什么？ 分离和提纯TRIM5蛋白质。 回答 根据蛋白质各种特性的差异，如分子的形状和大小、所带电荷的性质和多少、溶解度、吸附的性质、对其他分子的亲和力等等，可以用来分离不同蛋白质。 如何分离和提纯蛋白质？ 专题五 DNA和蛋白质技术 教学目标 知识目标 1.了解色谱法、电泳法等分离生物大分子的基本原理。 2.掌握蛋白质提取的基本概念。 能力目标 1.学习对血液中蛋白质提取和分离的方法。 2.掌握从复杂提取中提取生物大分子的基本过程和方法。 过程与方法 情感态度与价值观 本实验采取实验与课本相结合的方法，在实验中掌握分离大分子物质的基本方法。 1.发挥学生主观能动性。 2.激发学生学习兴趣，培养学会僧创新能力。 教学重难点 课题重点 凝胶色谱法的原理和方法。 课题难点 1.样品的预处理。 2.色谱柱填料的处理。 3.色谱柱的装填。 内容解析 概念：在一定的范围内，能对抗外来少量强酸、强碱或稍加稀释不引起溶液PH发生明显变化的作用叫做缓冲作用，具有缓冲作用的溶液叫做缓冲溶液。 缓冲溶液 基础知识 思考：说出说出几种常见的缓冲对 NaH2PO4 /Na2HPO4 H2CO3/NaHCO3 缓冲溶液由共轭酸碱对组成。这一共轭酸碱通常称为缓冲对、缓冲剂或缓冲系。常见的缓冲对主要有三种类型。 弱酸及其对应的盐： 弱碱及其对应的盐： 多元弱酸的酸式盐及其对应的次级盐: H2CO3→NaHCO3 ；CH3COOH→CH3COONa NH3?H2O→NH4CL ; NH4OH→NH4CL NaHCO3→Na2CO3 ；NaH2PO4→Na2HPO4 缓冲溶液通常由1~2种缓冲剂溶解于水中配制而成。 调节缓冲剂的使用比例就可以制得在不同PH范围内使用的缓冲液。 缓冲溶液的配制 利用缓冲液模拟细胞内的PH环境，保证血红蛋白的正常结构和功能，便于观察和科学研究。 凝胶色谱法 什么是凝胶？ 凝胶是一些多糖类构成的内含许多贯穿的通道的微小多孔的球体。 凝胶色谱法的原理 相对分子量较小的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，在凝胶的外部移动，路程较长，移动速度较慢。 相对分子量较大的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在凝胶外部移动，路程较短，移动速度较快。 电泳 带电粒子在电场作用下发生迁移的过程。 琼脂糖凝胶电泳 概念 分类 聚丙稀酰胺凝胶电泳 视频： 电泳的原理 试验设计 实验材料 动物血液 缓冲溶液 凝胶色谱柱 电泳装置 离心机 化学试剂 1.样品处理 血液的组成 实验操作 1.1 红细胞的洗涤： 离心将血液分层 用胶头吸管吸出黄色血浆 用生理盐水洗涤。 洗涤前 洗涤后 1.3 分离血红蛋白溶液： 离心分层；滤纸过滤去除脂溶性沉淀层；分液漏斗分出红色透明液体。 1.2 血红蛋白的释放： 在蒸馏水和甲苯作用下，红细胞破裂释放。 1.4 透析： 装入透析袋并置于磷酸缓冲液中（PH为7.0）透析。 2.凝胶色谱操作 2.1 凝胶色谱柱的制作 取胶皮盖 打孔 安装玻璃管 安装尼龙网 安装100目尼龙纱 组装 完成！ 2.2 凝胶色谱柱的装填 材料：交联葡聚糖凝胶（G-75） A、固定：将色谱柱装置固定在支架上 B、装填：将凝胶悬浮液一次性的装填入色谱柱内 装填方法： C、洗涤平衡：装填完毕后，用磷酸缓冲液缓冲液充分洗涤平衡12小时 2.3 样品的加样和洗脱 A、调节缓冲